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腺病毒感染目的細(xì)胞預(yù)實(shí)驗(yàn)-實(shí)驗(yàn)?zāi)康模捍_定腺病毒感染目的細(xì)胞的最低病毒量，各個(gè)細(xì)胞株的腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率都不太一樣， 其中尤以淋巴細(xì)胞株最難轉(zhuǎn)導(dǎo)。

輝駿生物腺病毒感染目的細(xì)胞具體實(shí)驗(yàn)步驟：

1.    實(shí)驗(yàn)前一天收集處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，生長(zhǎng)狀態(tài)良好的目的細(xì)胞，用完全培養(yǎng)基稀釋至1×105cells/mL，接種于96孔板（至少接種15個(gè)孔的量），每孔接種100  μL上述細(xì)胞懸 液（即1×104 cells/well）。5% CO2、37 ℃ 二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過夜。

2.    準(zhǔn)備12個(gè)無菌的1.5 mL EP管，分別加入180 μL的完全培養(yǎng)基。

3. 有限稀釋法稀釋病毒，從10-1~10-12：取20 μL腺病毒原液加入到第一個(gè)管的180 μL完全 培 養(yǎng)基中做1:10稀釋（10-1）；然后以此為起點(diǎn)，從第一個(gè)管取20 μL稀釋液到第二管 再做1:10稀釋（10-2），直至稀釋到10-12。

4.    從孵箱取出96孔板，顯微鏡下觀察確定細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)均良好。吸掉孔內(nèi)舊的培養(yǎng)基， 按10-1~10-12的濃度梯度，依次加入100 μL的病毒稀釋液到接種有目的細(xì)胞的96孔板中， 每種濃度接種一孔，沒有加入病毒液的細(xì)胞孔中加入同樣體積的完全培養(yǎng)基作為對(duì)照 組。37  ℃，5%CO2二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

5.    6-12 h以后觀察細(xì)胞狀態(tài)。如果細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組與空白組無明顯差異，表明病毒對(duì)細(xì)胞無明 顯毒性反應(yīng)，不要換液，繼續(xù)培養(yǎng)。

6.    由于腺病毒感染能力強(qiáng)，請(qǐng)分別在感染后的12、24、48 h觀察細(xì)胞中的熒光表達(dá)情況。 綜合細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)以及熒光表達(dá)量來判斷具有最佳作用效果的病毒稀釋度，并以此稀 釋度作為后續(xù)試驗(yàn)的依據(jù)。

注意: 在進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)時(shí)，請(qǐng)選擇生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行感染，并根據(jù)適當(dāng)?shù)?MOI 值以確定好適宜的感染劑量，過高滴度的感染劑量會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性甚至死亡。若是 用于免疫實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)根據(jù)不同的動(dòng)物和不同的免疫途徑確定合適的免疫劑量。