GST pull down技術(shù)是體外條件下研究蛋白質(zhì)相互作用的方法。先將體外表達的GST融合蛋白結(jié)合到谷胱甘肽Beads上,再將靶蛋白-GST-Beads和動物、植物或微生物樣本裂解液孵育,這樣互作蛋白便一起吸附在Beads上。洗滌掉未結(jié)合的蛋白后,再用洗脫液將互作蛋白復(fù)合物從Beads洗脫下來,即GST pull down產(chǎn)物。這種互作復(fù)合物既可以用Western Blot檢測已知蛋白,也可用質(zhì)譜鑒定出未知蛋白。
輝駿生物10年科研服務(wù)經(jīng)驗,專業(yè)提供分子互作實驗服務(wù),包括蛋白與蛋白、蛋白與DNA、蛋白與RNA、RNA與RNA的相互作用技術(shù),經(jīng)驗豐富,實驗結(jié)果穩(wěn)定可靠。
我公司自有分子、細胞和質(zhì)譜實驗平臺,能執(zhí)行最優(yōu)的實驗路線,對微量互作蛋白的質(zhì)譜鑒定有充足把控力,對后續(xù)功能分析有獨到見解。
我們不僅會提供專業(yè)的售前方案建議、而且售后技術(shù)支持將一直保持到文章發(fā)表,確保您安心進行下游實驗及投稿。
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蛋白-蛋白間的相互作用是蛋白質(zhì)發(fā)揮生物學(xué)功能的主要模式,蛋白質(zhì)會通過結(jié)合不同的伙伴來行駛不同的功能,形成復(fù)雜的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)。常見的蛋白相互作用方法主要有免疫共沉淀(Co-IP)、pull down、酵母雙雜交、熒光雙分子互補(BiFC)、熒光共定位等。
pull down技術(shù)將目標(biāo)蛋白進行體外原核表達,使標(biāo)簽蛋白(GST或His等)與目標(biāo)蛋白融合表達,借助標(biāo)簽的親和介質(zhì)將目標(biāo)蛋白純化出來,可以不受抗體、物種限制,比較輕松的獲得目標(biāo)蛋白的結(jié)合蛋白,還可以通過外源同時表達目標(biāo)蛋白和待測蛋白,確定它們是否發(fā)生直接的相互作用,或者確定兩個蛋白結(jié)合的結(jié)構(gòu)域,但該方法無法得知體內(nèi)真實的結(jié)合情況。
服務(wù)項目 | 服務(wù)內(nèi)容 | 結(jié)果交付 | 實驗周期 | 客戶提供 | 價格 |
GST pull down WB (驗證型) | 誘餌蛋白原核表達載體構(gòu)建(選做) | 載體質(zhì)粒、測序結(jié)果和實驗報告 | 4-5周 | 誘餌基因質(zhì)粒模板 實驗樣本 待測蛋白抗體 實驗信息表 | |
誘餌蛋白原核表達和Western blot檢測 | 誘餌蛋白Western blot檢測圖 | ||||
樣本中待測蛋白的Western blot檢測 | 待測蛋白Western blot檢測圖 | ||||
GST pull down捕獲誘餌蛋白及其互作蛋白 (實驗組、空載對照組) | 誘餌蛋白Western blot檢測圖 pull down實驗報告 | ||||
GST pull down MS (篩選型) | 誘餌蛋白原核表達載體構(gòu)建(選做) | 載體質(zhì)粒、測序結(jié)果和實驗報告 | 6-7周 | 誘餌基因質(zhì)粒模板 實驗樣本 實驗信息表 | |
誘餌蛋白原核表達和Western blot檢測 | 誘餌蛋白Western blot檢測圖 | ||||
GST pull down捕獲誘餌蛋白及其互作蛋白 (實驗組、GST對照組、裂解液對照組) | 誘餌蛋白Western blot檢測圖 pull down實驗報告 | ||||
LC-MS/MS檢測及數(shù)據(jù)分析 | 質(zhì)譜檢測結(jié)果及報告 互作蛋白篩選表格 生物信息學(xué)分析結(jié)果和報告 |
樣本類型 | GST pull down WB建議送樣量 | GST pull down MS建議送樣量 |
動物細胞 | 3*10e7個細胞/組(約3個10cm皿) | 5*10e7個細胞/組(約5個10cm皿) |
動物組織 | 1g/組 | 2g/組 |
植物葉片 | 2g/組 | 4g/組 |
植物根或果實 | 4g/組 | 8g/組 |
菌體 | 50ul菌體沉淀/組 | 100ul菌體沉淀/組 |
▲注意:這里列出的均為每組樣本的送樣量,如果實驗和對照組用的樣本一致,此樣本量*2。詳細送樣指南可聯(lián)系輝駿生物客服或銷售索取。
保存及運輸:-80℃保存,干冰取樣/運輸,至少在送樣前2天通知我司。
GST pull down WB結(jié)果圖(陽性)
GST Pull-down MS:Western blot檢測圖
GST pull-down MS:質(zhì)譜檢索表格(部分展示)
GST pull-down MS:互作蛋白生信分析結(jié)果(部分展示)
Chen S.L. et al: A GYS2/p53 Negative Feedback Loop Restricts Tumor Growth in HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. Cancer Research. 2018. (中科院1區(qū),IF=13.312).
糖代謝異常是癌癥的突出特征,作者前期研究發(fā)現(xiàn)肝細胞癌(HCC)中糖原含量降低,并與患者總體生存情況不良相關(guān),探索HCC中的異常糖代謝機制或許可以為肝細胞癌的治療提供新靶點。本研究首次報道了HCC組織中的糖原含量顯著降低,并與患者的不良預(yù)后相關(guān),這歸因于新發(fā)現(xiàn)的HBx/GYS2/p53信號軸。低表達的GYS2促進HCC細胞增殖而非遷移,并提供了兩條獨立的證據(jù)來支持GYS2和p53之間的關(guān)系。一方面,GYS2與MDM2競爭結(jié)合p53,以穩(wěn)定p53免于蛋白酶體降解;另一方面,p53以負反饋方式抑制GYS2表達和糖原含量。這些數(shù)據(jù)表明p53和GYS2可能通過平衡彼此的表達而在HCC中發(fā)揮功能。
1. Yu C.P. et al: Flot2 acts as a novel mediator of podocyte injury in proteinuric kidney disease. 2023. Int J Biol Sci. 2區(qū), IF=10.75. |
2. Chen S.L. et al: A GYS2/p53 Negative Feedback Loop Restricts Tumor Growth in HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. 2018. Cancer Research. 1區(qū), IF=13.312. |
3. You H. J. et al: Hepatitis B virus X protein promotes vimentin expression via LIM and SH3 domain protein 1 to facilitate epithelial-mesenchymal transition and hepatocarcinogenesis. Cell. 2021. Commun Signal. 2區(qū), IF=8.4. 使用相關(guān)技術(shù): GST-pull down實驗,gst pull down-ms實驗,LC-MS/MS蛋白質(zhì)譜鑒定 |
4. Wang J. et al: ENO1 Binds to ApoC3 and Impairs the Proliferation of T Cells via IL-8/STAT3 Pathway in OSCC. 2022. Int J Mol Sci. 2區(qū), IF=6.208. 【研究內(nèi)容】:α-烯醇化酶(ENO1)是一種代謝酶,與口腔鱗狀細胞癌(OSCC)淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究通過GST pull down MS尋找與轉(zhuǎn)移性O(shè)SCC患者術(shù)后淋巴引流液(PLD)中的ENO1相互作用的蛋白,發(fā)現(xiàn)了ENO1的新互作蛋白ApoC3。兩者的結(jié)合引起白細胞介素(IL)-8的產(chǎn)生,進而激活Jurkat T細胞STAT3信號通路,促進細胞凋亡,抑制Jurkat T細胞增殖。 使用相關(guān)技術(shù): GST pull-down MS實驗,gst pulldown實驗,LC-MS/MS質(zhì)譜鑒定 |
輝駿實力
1. GST Pull down WB,用于體外檢測誘餌蛋白與某樣本中的待測蛋白是否存在相互作用;
2. GST Pull down MS,用于體外篩選誘餌蛋白與某樣本中的哪些蛋白具有相互作用。
GST pull down檢測服務(wù) | |||||
服務(wù)項目 | 服務(wù)內(nèi)容 | 結(jié)果交付 | 實驗周期 | 客戶提供 | 價格 |
GST pull down WB | 構(gòu)建誘餌蛋白的GST原核表達載體(可選做) | 載體質(zhì)粒、甘油菌、測序結(jié)果和實驗報告 | 約2周 | 1、含有誘餌基因序列的質(zhì)粒模板及測序文件 2、實驗樣本 3、待測蛋白抗體 4、實驗信息表(樣本信息、誘餌蛋白和待測蛋白序列) | |
原核表達誘餌蛋白并進行Western blot檢測 | Western blot檢測圖 | 4-5周 | |||
Western blot檢測待測樣本中的獵物蛋白 | Western blot檢測圖 | ||||
GST pull down捕獲誘餌蛋白及其互作蛋白 (2組:實驗組、空載對照組) | pull down實驗報告 | ||||
Western blot檢測Pull down產(chǎn)物中的誘餌蛋白和待測蛋白 | Western blot檢測圖 | ||||
GST pull down MS | 構(gòu)建誘餌蛋白的GST原核表達載體(可選做) | 載體質(zhì)粒、甘油菌、測序結(jié)果和實驗報告 | 約2周 | 1、含有誘餌基因序列的質(zhì)粒模板及測序文件 2、實驗樣本 3、實驗信息表(樣本信息、誘餌蛋白序列) | |
原核表達誘餌蛋白并進行Western blot檢測 | Western blot檢測圖 | 4-5周 | |||
GST pull down捕獲誘餌蛋白及其互作蛋白 (3組:實驗組、空載對照組、裂解液對照組) | pull down實驗報告 | ||||
Western blot檢測pull down產(chǎn)物中的誘餌蛋白 | Western blot檢測圖 | ||||
LC-MS/MS定性檢測pull down產(chǎn)物的蛋白、篩選實驗組獨有蛋白(潛在互作蛋白) | 質(zhì)譜檢索表格、互作蛋白篩選表格、檢測報告 | ||||
針對互作蛋白做生物信息學(xué)分析(GO、KEGG pathway、String) | 生物信息學(xué)分析結(jié)果和報告 | 1周 |
樣本類型 | GST pull down WB建議送樣量 | GST pull down MS建議送樣量 |
動物細胞 | 3*10e7個細胞/組(約3個10cm皿) | 5*10e7個細胞/組(約5個10cm皿) |
動物組織 | 1g/組 | 2g/組 |
植物葉片 | 2g/組 | 4g/組 |
植物根或果實 | 4g/組 | 8g/組 |
菌體 | 50ul菌體沉淀/組 | 100ul菌體沉淀/組 |
▲注意:這里列出的均為每組樣本的送樣量,如果實驗和對照組用的樣本一致,此樣本量*2。詳細送樣指南可聯(lián)系輝駿生物客服或銷售索取。
(1)樣本用PBS清洗干凈后,離心去掉液體,先放入液氮中速凍,再轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱中保存;
(2)樣本一定要做好標(biāo)記,應(yīng)用油性防凍記號筆或標(biāo)簽紙在管上注明樣本名稱或編號;
(3)樣本較多或需要分批做,要將樣本分裝;
(4)干冰取樣/運輸;需要至少在送樣前一天通知我方。
gst pull down WB:Western blot檢測圖(陽性)
GST Pull-down MS:Western blot檢測圖
GST pulldown MS:質(zhì)譜檢索表格(部分展示)
GST pulldown MS蛋白生信分析結(jié)果示例
1. Chen S.L. et al: A GYS2/p53 Negative Feedback Loop Restricts Tumor Growth in HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. 2018. Cancer Research. 1區(qū), IF=13.312. 使用相關(guān)技術(shù): gst pulldown測定、GST-pull down質(zhì)譜分析、GST標(biāo)簽蛋白 |
2. Jiang L. et al: Bach1 Represses Wnt/β-Catenin Signaling and Angiogenesis. Circ Res. 2015,IF=14.467. |
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貨號 | 規(guī)格 | 貨期 | 價格 |
FI8804-20T | 20次 | 現(xiàn)貨 | |
FI8804-40T | 40次 | 現(xiàn)貨 |
輝駿生物的GST
pull-down試劑盒能夠高效調(diào)取GST融合蛋白在各類樣本中的互作蛋白。在GST
pull-down實驗前,先通過基因工程技術(shù)手段將目標(biāo)基因和GST基因序列連接起來,并導(dǎo)入大腸桿菌中進行原核表達和純化,之后融合蛋白通過GST標(biāo)簽與固相化在載體上的GTH(
Glutathione)親和結(jié)合。接下來,當(dāng)樣本中與融合蛋白有相互作用的蛋白通過層析柱時或與此固相復(fù)合物混合時就可被吸附而分離。
試劑名稱 | 體積(20 Tests) | 體積(40 Tests) | 保存條件 |
GST標(biāo)簽純化樹脂 | 950 μL | 1.9 mL | 4 ℃ |
裂解緩沖液(PH 7.4) | 24 mL | 48 mL | 4 ℃ |
漂洗緩沖液(5×) | 70 mL | 140 mL | 4 ℃ |
洗脫緩沖液(PH 2.0) | 1.1 mL | 2.2 mL | 4 ℃ |
蛋白酶抑制劑 | 600 μL | 1.2 mL | -20 ℃ |
1、調(diào)取效率高:GST融合蛋白與樹脂親和力強,可以高效純化目標(biāo)蛋白及其互作蛋白;
2、適用范圍廣,優(yōu)化的裂解液配方適用于動物、植物組織、微生物等各類型組織和細胞樣本;
3、洗脫液適配后續(xù)Western Blot及質(zhì)譜(LC-MS/MS)實驗;
4、操作簡便,耗時短,適用于初學(xué)者。
1. 通過原核表達系統(tǒng)表達帶有GST標(biāo)簽的融合蛋白;
2. 在細菌上清液中加入GST標(biāo)簽親和純化樹脂,4 ℃孵育2 小時;
3. 將待測樣本裂解液加入上述體系中,4 ℃孵育過夜;
4. 漂洗、洗脫得到目標(biāo)蛋白及其互作蛋白復(fù)合物。
1. Ni P.Y. et al: YBX1-Mediated DNA Methylation-Dependent SHANK3 Expression in PBMCs and Developing Cortical Interneurons in Schizophrenia. Advanced Science. 2023. IF=17.521.
2. Chen R. et al: Lnc-GD2H Promotes Proliferation by Forming a Feedback Loop With c-Myc and Enhances Differentiation Through Interacting With NACA to Upregulate Myog in C2C12 Myoblasts. Front Cell Dev Biol. 2021, IF=6.684.
3. Ma Y. et al: New insights into the proteins interacting with the promoters of silkworm fibroin genes. Scientific Reports. 2021, IF=4.379.
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