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實驗簡介買此服務(wù)買試劑盒
GST pull down實驗原理


GST pull down技術(shù)是體外條件下研究蛋白質(zhì)相互作用的方法。先將體外表達的GST融合蛋白結(jié)合到谷胱甘肽Beads上,再將靶蛋白-GST-Beads和動物、植物或微生物樣本裂解液孵育,這樣互作蛋白便一起吸附在Beads上。洗滌掉未結(jié)合的蛋白后,再用洗脫液將互作蛋白復(fù)合物從Beads洗脫下來,即GST pull down產(chǎn)物。這種互作復(fù)合物既可以用Western Blot檢測已知蛋白,也可用質(zhì)譜鑒定出未知蛋白。



輝駿生物10年科研服務(wù)經(jīng)驗,專業(yè)提供分子互作實驗服務(wù),包括蛋白與蛋白、蛋白與DNA、蛋白與RNA、RNA與RNA的相互作用技術(shù),經(jīng)驗豐富,實驗結(jié)果穩(wěn)定可靠。

我公司自有分子、細胞和質(zhì)譜實驗平臺,能執(zhí)行最優(yōu)的實驗路線,微量互作蛋白質(zhì)譜鑒定有充足把控力,對后續(xù)功能分析有獨到見解。

我們不僅會提供專業(yè)的售前方案建議、而且售后技術(shù)支持將一直保持到文章發(fā)表,確保您安心進行下游實驗及投稿。

目前,客戶已在Nature子刊、Oncogene、Cell Research等高水平期刊成功發(fā)表大量高分文章(點擊查看客戶文獻)。





GST pull-down * 實驗流程


gst pulldown實驗詳細步驟_GST-pull down實驗技術(shù)服務(wù)外包_GST標(biāo)簽蛋白.jpg


GST pull-down * 應(yīng)用背景


蛋白-蛋白間的相互作用是蛋白質(zhì)發(fā)揮生物學(xué)功能的主要模式,蛋白質(zhì)會通過結(jié)合不同的伙伴來行駛不同的功能,形成復(fù)雜的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)。常見的蛋白相互作用方法主要有免疫共沉淀(Co-IP)、pull down、酵母雙雜交、熒光雙分子互補(BiFC)、熒光共定位等。


pull down技術(shù)將目標(biāo)蛋白進行體外原核表達,使標(biāo)簽蛋白(GST或His等)與目標(biāo)蛋白融合表達,借助標(biāo)簽的親和介質(zhì)將目標(biāo)蛋白純化出來,可以不受抗體、物種限制,比較輕松的獲得目標(biāo)蛋白的結(jié)合蛋白,還可以通過外源同時表達目標(biāo)蛋白和待測蛋白,確定它們是否發(fā)生直接的相互作用,或者確定兩個蛋白結(jié)合的結(jié)構(gòu)域,但該方法無法得知體內(nèi)真實的結(jié)合情況。


聯(lián)系技術(shù)支持
18927549347、13430303037



GST pull-down * 輝駿服務(wù)內(nèi)容


 服務(wù)項目服務(wù)內(nèi)容結(jié)果交付實驗周期  
客戶提供價格

GST pull down WB

(驗證型)

誘餌蛋白原核表達載體構(gòu)建(選做)載體質(zhì)粒、測序結(jié)果和實驗報告4-5周

誘餌基因質(zhì)粒模板

實驗樣本

待測蛋白抗體

實驗信息表

點擊詢價



誘餌蛋白原核表達和Western blot檢測誘餌蛋白Western blot檢測圖
樣本中待測蛋白的Western blot檢測待測蛋白Western blot檢測圖

GST pull down捕獲誘餌蛋白及其互作蛋白

(實驗組、空載對照組)

誘餌蛋白Western blot檢測圖

pull down實驗報告

GST pull down  MS

(篩選型)       

誘餌蛋白原核表達載體構(gòu)建(選做)

載體質(zhì)粒、測序結(jié)果和實驗報告

6-7周      

誘餌基因質(zhì)粒模板

實驗樣本

實驗信息表

點擊詢價

誘餌蛋白原核表達和Western blot檢測誘餌蛋白Western blot檢測圖

GST pull down捕獲誘餌蛋白及其互作蛋白

(實驗組、GST對照組、裂解液對照組)

誘餌蛋白Western blot檢測圖

pull down實驗報告

LC-MS/MS檢測及數(shù)據(jù)分析

質(zhì)譜檢測結(jié)果及報告

互作蛋白篩選表格

生物信息學(xué)分析結(jié)果和報告



GST pull-down * 樣本要求


樣本類型

GST pull down WB建議送樣量

GST pull down MS建議送樣量

動物細胞3*10e7個細胞/組(約3個10cm皿)5*10e7個細胞/組(約5個10cm皿)
動物組織1g/組2g/組
植物葉片2g/組4g/組
植物根或果實4g/組
8g/組
菌體50ul菌體沉淀/組100ul菌體沉淀/組

▲注意:這里列出的均為每組樣本的送樣量,如果實驗和對照組用的樣本一致,此樣本量*2。詳細送樣指南可聯(lián)系輝駿生物客服或銷售索取。

 保存及運輸:-80℃保存,干冰取樣/運輸,至少在送樣前2天通知我司。



GST pull-down * 結(jié)果示例


GST pull down試驗服務(wù)結(jié)果分析

GST pull down WB結(jié)果圖(陽性)



GST-pull down外包實驗服務(wù)結(jié)果分析

GST Pull-down MS:Western blot檢測圖



GST pull down實驗服務(wù)費用價格實惠質(zhì)量高

GST pull-down MS:質(zhì)譜檢索表格(部分展示)



pull down生信分析結(jié)果.jpg

GST pull-down MS:互作蛋白生信分析結(jié)果(部分展示)


聯(lián)系技術(shù)支持
18927549347、13430303037



GST pull-down服務(wù)案例—客戶文章解析


Chen S.L. et al:  A GYS2/p53 Negative Feedback Loop Restricts Tumor Growth in HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. Cancer Research. 2018. (中科院1區(qū),IF=13.312).


GYS2/p53負反饋環(huán)抑制HBV相關(guān)性肝細胞癌的腫瘤生長



研究概述

糖代謝異常是癌癥的突出特征,作者前期研究發(fā)現(xiàn)肝細胞癌(HCC)中糖原含量降低,并與患者總體生存情況不良相關(guān),探索HCC中的異常糖代謝機制或許可以為肝細胞癌的治療提供新靶點。本研究首次報道了HCC組織中的糖原含量顯著降低,并與患者的不良預(yù)后相關(guān),這歸因于新發(fā)現(xiàn)的HBx/GYS2/p53信號軸。低表達的GYS2促進HCC細胞增殖而非遷移,并提供了兩條獨立的證據(jù)來支持GYS2和p53之間的關(guān)系。一方面,GYS2與MDM2競爭結(jié)合p53,以穩(wěn)定p53免于蛋白酶體降解;另一方面,p53以負反饋方式抑制GYS2表達和糖原含量。這些數(shù)據(jù)表明p53和GYS2可能通過平衡彼此的表達而在HCC中發(fā)揮功能。


摘要圖.png


研究路線

RNA-seq和qPCR等結(jié)果顯示HCC組織中的GYS2(糖原合成酶2)顯著下調(diào),并與患者不良預(yù)后相關(guān)
細胞和小鼠實驗表明GYS2的缺失促進了肝癌細胞增殖和腫瘤生長
GYS2敲除細胞的RNA-seq實驗發(fā)現(xiàn)p53通路都受到明顯抑制
Co-IP和 GST pull down證明GYS2通過與p53的直接相互作用發(fā)揮腫瘤抑制功能
CO-IP和GST pull down實驗發(fā)現(xiàn)GYS2、p53和E3泛素連接酶MDM2相互作用形成復(fù)合體,GYS2與p53競爭結(jié)合MDM2來抑制p53泛素化,穩(wěn)定p53蛋白水平
熒光素酶和ChIP等實驗表明p53蛋白結(jié)臺GYS2啟動子,通過p300介導(dǎo)的乙?;谵D(zhuǎn)錄水平上抑制GYS2
對HBV陽性肝中的關(guān)鍵致癌蛋白HBx的研究發(fā)現(xiàn),HBx、HDAC1與乙?;膒53相互作用,共同抑制了GYS2




GST pull down服務(wù) * 客戶文章


1. Yu C.P. et al: Flot2 acts as a novel mediator of podocyte injury in proteinuric kidney disease. 2023. Int J Biol Sci. 2區(qū), IF=10.75.
【研究內(nèi)容】:足細胞損傷是慢性腎臟疾病(CKD)的常見標(biāo)志。本研究證實Flot2在足細胞中表達,且能減少足細胞損傷。在LPS/ADR誘導(dǎo)腎病小鼠模型中,足細胞特異性Flot2的缺失會加重蛋白尿、足細胞損傷和腎小球病變。通過GST pull down和Co-IP實驗,發(fā)現(xiàn)Flot2和podocin通過SPFH結(jié)構(gòu)域直接相互作用。同時還發(fā)現(xiàn)Flot-2是轉(zhuǎn)錄因子KLF15的直接靶點。
使用相關(guān)技術(shù): GST pull down實驗、免疫共沉淀Co-IP


2. Chen S.L. et al: A GYS2/p53 Negative Feedback Loop Restricts Tumor Growth in HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. 2018. Cancer Research. 1區(qū), IF=13.312.
【研究內(nèi)容】:糖原合成酶2(GYS2)在HCC中的表達明顯下調(diào),并與糖原含量降低和不良患者預(yù)后相關(guān)。本研究利用Co-IP和GST pull down等方法證明GYS2與MDM2競爭性結(jié)合,阻止MDM2介導(dǎo)的p53泛素化和降解;GYS2還增強了p300誘導(dǎo)的p53蛋白K373/382位點的乙酰化,進而負反饋抑制了HBx/HDAC1復(fù)合物支持下的GYS2轉(zhuǎn)錄,從而限制乙肝病毒相關(guān)性肝癌的生長。
使用相關(guān)技術(shù): GST 融合蛋白、GST pulldown實驗、GST pull-down技術(shù)


3. You H. J. et al: Hepatitis B virus X protein promotes vimentin expression via LIM and SH3 domain protein 1 to facilitate epithelial-mesenchymal transition and hepatocarcinogenesis. Cell. 2021. Commun Signal. 2區(qū), IF=8.4.
【研究內(nèi)容】:波形蛋白(vimentin)在乙肝病毒X(HBX)陽性的肝癌細胞和HBV相關(guān)肝細胞癌(HCC)組織中的表達均升高。機制研究表明,HBX能夠通過LASP1增強了vimentin的表達。一方面,PI3-K、ERK和STAT3信號通路參與了LASP1介導(dǎo)的vimentin上調(diào)。另一方面,GST pull down方法確定了HBX直接與vimentin和LASP1相互作用,保護vimentin免受泛素化介導(dǎo)的蛋白降解,促進Vimentin蛋白的穩(wěn)定性。

使用相關(guān)技術(shù): GST-pull down實驗,gst pull down-ms實驗,LC-MS/MS蛋白質(zhì)譜鑒定


4. Wang J. et al: ENO1 Binds to ApoC3 and Impairs the Proliferation of T Cells via IL-8/STAT3 Pathway in OSCC. 2022. Int J Mol Sci. 2區(qū), IF=6.208.

【研究內(nèi)容】:α-烯醇化酶(ENO1)是一種代謝酶,與口腔鱗狀細胞癌(OSCC)淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究通過GST pull down MS尋找與轉(zhuǎn)移性O(shè)SCC患者術(shù)后淋巴引流液(PLD)中的ENO1相互作用的蛋白,發(fā)現(xiàn)了ENO1的新互作蛋白ApoC3。兩者的結(jié)合引起白細胞介素(IL)-8的產(chǎn)生,進而激活Jurkat T細胞STAT3信號通路,促進細胞凋亡,抑制Jurkat T細胞增殖。

使用相關(guān)技術(shù): GST pull-down MS實驗,gst pulldown實驗,LC-MS/MS質(zhì)譜鑒定




GST pull down * 輝駿服務(wù)優(yōu)勢


1
近十年服務(wù)經(jīng)驗,服務(wù)客戶眾多,案例發(fā)表在Nature Cell Biology、Nature Plants、Cancer Research等知名期刊上
2
對蛋白互作的篩選鑒定理解深刻,擅長針對客戶具體情況提出合適的方案建議
3
自有分子及細胞生物實驗平臺,能有效制定并執(zhí)行最優(yōu)的實驗路線
4
自有蛋白質(zhì)組學(xué)平臺,對微量CoIP實驗產(chǎn)物的質(zhì)譜鑒定有十足的把控能力,對后續(xù)的生物信息分析有獨到的見解
5
售后技術(shù)支持將一直保持到客戶發(fā)表文章,確保客戶安心免疫共沉淀下游實驗及投稿


GST pull-down試劑盒-高效純化 高靈敏 特異性強-輝駿生物價格低


輝駿實力


輝駿DNA-pull down實驗技術(shù)外包服務(wù)

輝駿生物提供的GST Pull down實驗技術(shù)服務(wù)分為以下兩種:


1. GST Pull down WB,用于體外檢測誘餌蛋白與某樣本中的待測蛋白是否存在相互作用;

2. GST Pull down MS,用于體外篩選誘餌蛋白與某樣本中的哪些蛋白具有相互作用。


GST pull down檢測服務(wù)

服務(wù)項目服務(wù)內(nèi)容結(jié)果交付實驗周期  
客戶提供價格
GST pull down WB構(gòu)建誘餌蛋白的GST原核表達載體(可選做)載體質(zhì)粒、甘油菌、測序結(jié)果和實驗報告約2周        

1、含有誘餌基因序列的質(zhì)粒模板及測序文件

2、實驗樣本

3、待測蛋白抗體

4、實驗信息表(樣本信息、誘餌蛋白和待測蛋白序列)

點擊詢價



原核表達誘餌蛋白并進行Western blot檢測Western blot檢測圖4-5周
Western blot檢測待測樣本中的獵物蛋白Western blot檢測圖

GST pull down捕獲誘餌蛋白及其互作蛋白

(2組:實驗組、空載對照組)
pull down實驗報告
Western blot檢測Pull down產(chǎn)物中的誘餌蛋白和待測蛋白Western blot檢測圖
GST pull down  MS       
構(gòu)建誘餌蛋白的GST原核表達載體(可選做)

載體質(zhì)粒、甘油菌、測序結(jié)果和實驗報告

約2周      

1、含有誘餌基因序列的質(zhì)粒模板及測序文件

2、實驗樣本

3、實驗信息表(樣本信息、誘餌蛋白序列)

點擊詢價

原核表達誘餌蛋白并進行Western blot檢測Western blot檢測圖4-5周

GST pull down捕獲誘餌蛋白及其互作蛋白

(3組:實驗組、空載對照組、裂解液對照組)
pull down實驗報告
Western blot檢測pull down產(chǎn)物中的誘餌蛋白Western blot檢測圖
LC-MS/MS定性檢測pull down產(chǎn)物的蛋白、篩選實驗組獨有蛋白(潛在互作蛋白)質(zhì)譜檢索表格、互作蛋白篩選表格、檢測報告
針對互作蛋白做生物信息學(xué)分析(GO、KEGG pathway、String)生物信息學(xué)分析結(jié)果和報告1周


聯(lián)系技術(shù)支持了解pull down實驗服務(wù)排期、優(yōu)惠等
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GST pull down技術(shù)服務(wù)優(yōu)勢*輝駿生物

1
近十年服務(wù)經(jīng)驗,眾多服務(wù)案例,服務(wù)成果得到優(yōu)秀期刊認可
2
對蛋白互作的篩選鑒定理解深刻,擅長針對客戶情況提出合適的方案建議
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自有分子及細胞生物實驗平臺,能有效制定并執(zhí)行最優(yōu)的實驗路線
4
自有蛋白質(zhì)組學(xué)平臺,對微量互作蛋白的質(zhì)譜鑒定有十足的把控能力,對后續(xù)的生物信息分析有獨到的見解
5
售后技術(shù)支持將一直保持到客戶發(fā)表文章,確??蛻舭残倪M行下游實驗及投稿





GST pull down實驗服務(wù)樣本要求


1. 送樣量要求

樣本類型

GST pull down WB建議送樣量

GST pull down MS建議送樣量

動物細胞3*10e7個細胞/組(約3個10cm皿)5*10e7個細胞/組(約5個10cm皿)
動物組織1g/組2g/組
植物葉片2g/組4g/組
植物根或果實4g/組
8g/組
菌體50ul菌體沉淀/組100ul菌體沉淀/組


▲注意:這里列出的均為每組樣本的送樣量,如果實驗和對照組用的樣本一致,此樣本量*2。詳細送樣指南可聯(lián)系輝駿生物客服或銷售索取。

 


2. 樣本保存和運輸要求:


(1)樣本用PBS清洗干凈后,離心去掉液體,先放入液氮中速凍,再轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱中保存;

(2)樣本一定要做好標(biāo)記,應(yīng)用油性防凍記號筆或標(biāo)簽紙在管上注明樣本名稱或編號;

(3)樣本較多或需要分批做,要將樣本分裝;

(4)干冰取樣/運輸;需要至少在送樣前一天通知我方。

 




GST pull-down實驗結(jié)果示例


GST pull down試驗服務(wù)結(jié)果分析

gst pull down WB:Western blot檢測圖(陽性)


GST-pull down外包實驗服務(wù)結(jié)果分析

GST Pull-down MS:Western blot檢測圖


GST pull down實驗服務(wù)費用價格實惠質(zhì)量高

GST pulldown MS:質(zhì)譜檢索表格(部分展示)


pull down生信分析結(jié)果.jpg

GST pulldown MS蛋白生信分析結(jié)果示例



GST pull down實驗服務(wù)客戶文章


1. Chen S.L. et al: A GYS2/p53 Negative Feedback Loop Restricts Tumor Growth in HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. 2018. Cancer Research. 1區(qū), IF=13.312.
【研究內(nèi)容】:糖原合成酶2(GYS2)在HCC中的表達明顯下調(diào),并與糖原含量降低和不良患者預(yù)后相關(guān)。本研究利用Co-IP和GST pull down等方法證明GYS2與MDM2競爭性結(jié)合,阻止MDM2介導(dǎo)的p53泛素化和降解;GYS2還增強了p300誘導(dǎo)的p53蛋白K373/382位點的乙?;?,進而負反饋抑制了HBx/HDAC1復(fù)合物支持下的GYS2轉(zhuǎn)錄,從而限制乙肝病毒相關(guān)性肝癌的生長。

使用相關(guān)技術(shù): gst pulldown測定、GST-pull down質(zhì)譜分析、GST標(biāo)簽蛋白


2. Jiang L. et al: Bach1 Represses Wnt/β-Catenin Signaling and Angiogenesis. Circ Res. 2015,IF=14.467.
【研究內(nèi)容】:Wnt/β-catenin信號在內(nèi)皮細胞的血管生成活性中起重要作用。過表達實驗表明,轉(zhuǎn)錄因子Bach1過表達可抑制后肢缺血小鼠的血管生成,并抑制Wnt3a刺激的血管生成反應(yīng)和人臍靜脈內(nèi)皮細胞Wnt/β-catenin靶基因的表達。Co-IP實驗和gst pull-down分析表明,Bach1直接與TCF4結(jié)合,并減少β-catenin與TCF4的相互作用。研究揭示了Bach1抑制外周缺血損傷后的血管生成的作用機制,為血管生成治療或其他涉及Wnt/β-catenin通路異常調(diào)節(jié)的疾病提供了新的治療靶點。
使用相關(guān)技術(shù): GST 融合蛋白、GST pull-down實驗、GST pull-down技術(shù)


輝駿DNA-pull down實驗技術(shù)外包服務(wù)


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GST pull-down試劑盒



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GST pull-down試劑盒產(chǎn)品簡介


輝駿生物的GST pull-down試劑盒能夠高效調(diào)取GST融合蛋白在各類樣本中的互作蛋白。在GST pull-down實驗前,先通過基因工程技術(shù)手段將目標(biāo)基因和GST基因序列連接起來,并導(dǎo)入大腸桿菌中進行原核表達和純化,之后融合蛋白通過GST標(biāo)簽與固相化在載體上的GTH( Glutathione)親和結(jié)合。接下來,當(dāng)樣本中與融合蛋白有相互作用的蛋白通過層析柱時或與此固相復(fù)合物混合時就可被吸附而分離。




GST pull down試劑盒組分


 試劑名稱 體積(20 Tests) 體積(40 Tests) 保存條件
 GST標(biāo)簽純化樹脂 950 μL 1.9 mL 4 ℃
 裂解緩沖液(PH 7.4) 24 mL 48 mL 4 ℃
 漂洗緩沖液(5×) 70 mL 140 mL 4 ℃
 洗脫緩沖液(PH 2.0) 1.1 mL 2.2 mL 4 ℃
 蛋白酶抑制劑 600 μL 1.2 mL -20 ℃





GST Pull down試劑盒產(chǎn)品優(yōu)勢*輝駿生物

1、調(diào)取效率高GST融合蛋白與樹脂親和力強,可以高效純化目標(biāo)蛋白及其互作蛋白;

2、適用范圍廣,優(yōu)化的裂解液配方適用于動物、植物組織、微生物等各類型組織和細胞樣本;

3、洗脫液適配后續(xù)Western Blot質(zhì)譜(LC-MS/MS)實驗;

4、操作簡便,耗時短,適用于初學(xué)者。

gst pulldown試劑盒-操作簡便-周期短-輝駿生物.png




GST pulldown試劑盒使用流程簡述


1. 通過原核表達系統(tǒng)表達帶有GST標(biāo)簽的融合蛋白;

2. 在細菌上清液中加入GST標(biāo)簽親和純化樹脂,4 ℃孵育2 小時;

3. 將待測樣本裂解液加入上述體系中,4 ℃孵育過夜;

4. 漂洗、洗脫得到目標(biāo)蛋白及其互作蛋白復(fù)合物。




GST pull down試劑盒—客戶文章


1. Ni P.Y. et al: YBX1-Mediated DNA Methylation-Dependent SHANK3 Expression in PBMCs and Developing Cortical Interneurons in Schizophrenia. Advanced Science. 2023. IF=17.521. 

2. Chen R. et al: Lnc-GD2H Promotes Proliferation by Forming a Feedback Loop With c-Myc and Enhances Differentiation Through Interacting With NACA to Upregulate Myog in C2C12 Myoblasts. Front Cell Dev Biol. 2021, IF=6.684. 

3. Ma Y. et al: New insights into the proteins interacting with the promoters of silkworm fibroin genes. Scientific Reports. 2021, IF=4.379.



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