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實(shí)驗(yàn)簡介買此服務(wù)

串聯(lián)親和純化質(zhì)譜TAP-MS * 實(shí)驗(yàn)介紹


串聯(lián)親和純化質(zhì)譜(TAP MS)技術(shù)采用兩輪純化的方法調(diào)取誘餌蛋白及其互作蛋白復(fù)合體。首先,在目的細(xì)胞中過表達(dá)帶有TST-Flag雙標(biāo)簽的誘餌蛋白;樣本經(jīng)裂解后,先與Streptactin樹脂孵育、初次洗滌及洗脫,得到首次純化的蛋白復(fù)合物;再將此蛋白復(fù)合物與anti-Flag樹脂結(jié)合、再次洗滌及洗脫,得到第二輪純化的蛋白復(fù)合物;最后,質(zhì)譜鑒定復(fù)合物中的誘餌蛋白互作蛋白。



輝駿生物10年科研服務(wù)經(jīng)驗(yàn),專業(yè)提供分子互作實(shí)驗(yàn)服務(wù),包括蛋白與蛋白、蛋白與DNA、蛋白與RNA、RNA與RNA的相互作用技術(shù),經(jīng)驗(yàn)豐富,實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定、可靠。

我公司自有分子、細(xì)胞和質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)平臺(tái),能執(zhí)行最優(yōu)的實(shí)驗(yàn)路線,對微量互作蛋白的質(zhì)譜鑒定有充足把控力,對后續(xù)功能分析有獨(dú)到見解。

我們不僅會(huì)提供專業(yè)的售前方案建議、而且售后技術(shù)支持將一直保持到文章發(fā)表,確保您安心進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)及投稿。

目前,客戶已在Nature子刊、Oncogene、Cell Research等高水平期刊成功發(fā)表大量高分文章(點(diǎn)擊查看客戶文獻(xiàn))。




串聯(lián)親和純化質(zhì)譜TAP-MS * 實(shí)驗(yàn)流程


代做串聯(lián)親和純化-質(zhì)譜,tap ms實(shí)驗(yàn).jpg




串聯(lián)親和純化質(zhì)譜TAP MS * 應(yīng)用背景


隨著確定細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的相互作用成為當(dāng)今生命科學(xué)的研究熱點(diǎn),雙雜交技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于研究蛋白—蛋白間的相互作用,但由于其篩選步驟復(fù)雜,假陽性結(jié)果較多,難于量化,故不能滿足大規(guī)模蛋白質(zhì)研究的需要,因此串聯(lián)親和純化(TAP)技術(shù)以其高效、高純度、以及能夠高度模擬真實(shí)生理?xiàng)l件等優(yōu)勢,迅速成為篩選、發(fā)現(xiàn)和鑒別新的相互作用蛋白質(zhì)的主流技術(shù)之一。

目前,TAP技術(shù)與質(zhì)譜技術(shù)的聯(lián)用,以及質(zhì)譜技術(shù)的自動(dòng)化,使得大規(guī)模地分析相互作用的蛋白質(zhì)在技術(shù)上成為可能。

TAP技術(shù)采用兩步親和純化,提高了純化產(chǎn)物的特異性,具有周期短、假陽性結(jié)果少等優(yōu)點(diǎn)。通過這種方法鑒定到的蛋白質(zhì)相互作用能真實(shí)地反映出細(xì)胞中蛋白質(zhì)分子之間的聯(lián)系,實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加接近真實(shí)情況,而且TAP技術(shù)還特別適用于蛋白質(zhì)組水平上的大規(guī)模研究。


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18927549347




串聯(lián)親和純化質(zhì)譜TAP MS * 輝駿服務(wù)內(nèi)容


TAP(串聯(lián)親和純化)檢測服務(wù)
服務(wù)項(xiàng)目服務(wù)內(nèi)容結(jié)果交付實(shí)驗(yàn)周期客戶提價(jià)格
TAP MS構(gòu)建誘餌蛋白的TAP雙標(biāo)簽表達(dá)載體
載體質(zhì)粒、甘油菌、測序結(jié)果和實(shí)驗(yàn)報(bào)告約2周

含有誘餌基因序列的質(zhì)粒模板及測序文件

待測細(xì)胞及其培養(yǎng)方法

實(shí)驗(yàn)信息表(樣本信息、誘餌蛋白序列)



點(diǎn)擊詢價(jià)



包裝慢病毒并進(jìn)行誘餌蛋白的穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株篩選慢病毒包裝和穩(wěn)轉(zhuǎn)株實(shí)驗(yàn)報(bào)告5-6周
Western blot檢測樣本(input)中的誘餌蛋白Western blot檢測圖7-8周

TAP調(diào)取誘餌蛋白及其互作蛋白

(2組:實(shí)驗(yàn)組、空載對照組)
TAP實(shí)驗(yàn)報(bào)告
Western blot檢測TAP產(chǎn)物中的誘餌蛋白Western blot檢測圖
LC-MS/MS定性檢測TAP產(chǎn)物的蛋白、篩選實(shí)驗(yàn)組獨(dú)有蛋白(潛在互作蛋白)質(zhì)譜檢索表格、互作蛋白篩選表格、檢測報(bào)告
針對互作蛋白做生物信息學(xué)分析(GO、KEGG pathway、String)生物信息學(xué)分析結(jié)果和報(bào)告1周





串聯(lián)親和純化TAP MS * 結(jié)果示例

圖片.png

TAP MS:Western blot檢測圖



圖片.png

TAP MS:質(zhì)譜檢索表格(部分展示)



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TAP-MS實(shí)驗(yàn)研究案例—客戶文章解析


Hadir Marei. et al: Differential Rac1 signalling by guanine nucleotideexchange factors implicates FLII in regulating Rac1-driven cell migration.

Nat Communications. 2016,IF=14.919.


鳥嘌呤核苷酸交換因子的差異rac1信號(hào)涉及FLII在調(diào)節(jié)rac1驅(qū)動(dòng)的細(xì)胞遷移中的作用


研究概述

 

小的GTP酶 rac1與腫瘤的形成和擴(kuò)散有關(guān)。當(dāng)被鳥嘌呤核苷酸交換因子(GEF)激活時(shí),rac1與細(xì)胞中的各種蛋白質(zhì)結(jié)合,從而調(diào)節(jié)各種功能,包括細(xì)胞遷移。然而,當(dāng)在臨床環(huán)境中以rac1為靶點(diǎn)時(shí),rac1的激活可以導(dǎo)致相反的遷移表型,增加了加劇腫瘤進(jìn)展的可能性。這就需要確定影響rac1驅(qū)動(dòng)的細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的因素。本研究證實(shí)P-Rex1不僅能激活rac1,而且還能將蛋白質(zhì)(如FLII)定向到rac1的活性形式,以介導(dǎo)特定的細(xì)胞功能,包括細(xì)胞收縮,從而使P-Rex1能夠促進(jìn)細(xì)胞遷移。因此,這項(xiàng)研究提供了對以前未報(bào)道的P-REx1-rac1介導(dǎo)細(xì)胞遷移的細(xì)胞功能的洞察力,并強(qiáng)調(diào)了P-Rex1和rac1可能驅(qū)動(dòng)癌癥擴(kuò)散其他模式。



研究路線

1

過表達(dá)與 pull down實(shí)驗(yàn)證實(shí)Tiam1和P-Rex1誘導(dǎo)不同的rac1下游效應(yīng)

2

通過TAP/ SILAC結(jié)合的方法檢測 Tiam1或 P-Rex1誘導(dǎo)后的rac1相互作用體,證實(shí)Tiam1和P-Rex1對racl互動(dòng)體有不同的調(diào)控作用

3

免疫共沉淀、 GST pull down和PLA實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)FLII優(yōu)先與活性racl結(jié)合FLII是一種新的富含P-RExl的rac1結(jié)合伙伴

4

結(jié)構(gòu)域分析證實(shí)FLII通過不同的結(jié)構(gòu)域與rac1和P-Rex1結(jié)合

5

Pull down實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)證實(shí)FLII是P-REx1-rac1驅(qū)動(dòng)的細(xì)胞遷移所必需的

6

基因敲除實(shí)驗(yàn)表明P-Rex1可以通過FLII介導(dǎo)特定的細(xì)胞功能,包括細(xì)胞收縮,從而促進(jìn)細(xì)胞遷移




TAP MS * 客戶文章


1.  Li X.et al: Proteomic analyses reveal distinct chromatin-associated and soluble transcription factor complexes.Molecular Systems Biology.2015 ,  IF=8.991.

【研究內(nèi)容】:轉(zhuǎn)錄因子(TF)是細(xì)胞信號(hào)通路的終極靶標(biāo)和執(zhí)行者。在這項(xiàng)研究中,作者對56個(gè)TF的可溶性和染色相關(guān)復(fù)合物進(jìn)行了蛋白質(zhì)組學(xué)分析,利用串聯(lián)親和純化和質(zhì)譜(TAP/MS)技術(shù)進(jìn)行純化,并鑒定其中的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。研究為大量的TF提供了有價(jià)值的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)資源,強(qiáng)調(diào)了TF形成不同位置特異性的蛋白質(zhì)復(fù)合物的一般原理,這些復(fù)合物與TF的不同調(diào)控和不同功能有關(guān)。

使用技術(shù)TAP MS技術(shù)服務(wù)、串聯(lián)親和純化-質(zhì)譜、串聯(lián)親和純化實(shí)驗(yàn)怎么做




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實(shí)驗(yàn)試劑盒
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? GST pull down 試劑盒

? COIP 試劑盒

? Flag 試劑盒






輝駿實(shí)力

輝駿實(shí)驗(yàn)外包服務(wù).jpg

4899+客戶已添加微信獲取實(shí)驗(yàn)優(yōu)惠!

輝駿生物提供的TAP(串聯(lián)親和純化)服務(wù)采用flag標(biāo)簽和TST標(biāo)簽進(jìn)行串聯(lián)純化,用于篩選某樣本中的誘餌蛋白與哪些蛋白具有相互作用。


TAP(串聯(lián)親和純化)檢測服務(wù)
服務(wù)項(xiàng)目服務(wù)內(nèi)容結(jié)果交付實(shí)驗(yàn)周期客戶提價(jià)格
TAP MS構(gòu)建誘餌蛋白的TAP雙標(biāo)簽表達(dá)載體
載體質(zhì)粒、甘油菌、測序結(jié)果和實(shí)驗(yàn)報(bào)告約2周

1、含有誘餌基因序列的質(zhì)粒模板及測序文件

2、待測細(xì)胞及其培養(yǎng)方法

3、實(shí)驗(yàn)信息表(樣本信息、誘餌蛋白序列)



點(diǎn)擊詢價(jià)



包裝慢病毒并進(jìn)行誘餌蛋白的穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株篩選慢病毒包裝和穩(wěn)轉(zhuǎn)株實(shí)驗(yàn)報(bào)告5-6周
Western blot檢測樣本(input)中的誘餌蛋白Western blot檢測圖7-8周

TAP調(diào)取誘餌蛋白及其互作蛋白

(2組:實(shí)驗(yàn)組、空載對照組)
TAP實(shí)驗(yàn)報(bào)告
Western blot檢測TAP產(chǎn)物中的誘餌蛋白Western blot檢測圖
LC-MS/MS定性檢測TAP產(chǎn)物的蛋白、篩選實(shí)驗(yàn)組獨(dú)有蛋白(潛在互作蛋白)質(zhì)譜檢索表格、互作蛋白篩選表格、檢測報(bào)告
針對互作蛋白做生物信息學(xué)分析(GO、KEGG pathway、String)生物信息學(xué)分析結(jié)果和報(bào)告1周


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TAP串聯(lián)親和純化服務(wù)優(yōu)勢*輝駿生物

1 近十年服務(wù)經(jīng)驗(yàn),服務(wù)客戶眾多


2 對蛋白互作的篩選鑒定理解深刻,擅長針對客戶具體情況提出合適的方案建議


3自有分子及細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)平臺(tái),能有效制定并執(zhí)行最優(yōu)的實(shí)驗(yàn)路線


4 自有蛋白質(zhì)組學(xué)平臺(tái),對微量TAP實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物的質(zhì)譜鑒定有十足的把控能力,對后續(xù)的生物信息分析有獨(dú)到的見解


5 售后技術(shù)支持將一直保持到客戶發(fā)表文章,確??蛻舭残拿庖吖渤恋硐掠螌?shí)驗(yàn)及投稿




TAP-MS實(shí)驗(yàn)樣本要求


1. 送樣量要求


樣本類型
TAP-MS建議送樣量
野生型細(xì)胞株

(廣州市內(nèi)客戶)可接受活細(xì)胞,2個(gè)T25瓶,細(xì)胞匯合度>80%;

(其他地區(qū)客戶)凍存細(xì)胞2管。

穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株1*10e8個(gè)細(xì)胞/組(約10個(gè)10cm皿),2組共計(jì)2*10e8個(gè)細(xì)胞


▲注意:如果客戶提供初始細(xì)胞株,需要同時(shí)提供詳細(xì)的細(xì)胞培養(yǎng)方法,廣州市內(nèi)客戶可提供復(fù)蘇后的細(xì)胞,其他地區(qū)客戶請?zhí)峁﹥龃婕?xì)胞。

 


2. 樣本保存和運(yùn)輸要求:

(1)如果客戶自行準(zhǔn)備穩(wěn)轉(zhuǎn)株,細(xì)胞沉淀用PBS清洗干凈后,離心去掉液體,先放入液氮中速凍,再轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱中保存;

(2)樣本一定要做好標(biāo)記,應(yīng)用油性防凍記號(hào)筆或標(biāo)簽紙?jiān)诠苌献⒚鳂颖久Q或編號(hào);

(3)樣本較多或需要分批做,要將樣本分裝;

(4)干冰取樣/運(yùn)輸;需要至少在送樣前一天通知我方。

 



串聯(lián)親和純化TAP技術(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果示例

圖片.png

TAP MS:Western blot檢測圖


圖片.png

TAP MS:質(zhì)譜檢索表格(部分展示)





TAP MS客戶文章


1. Reinaldo F.M. et al: Destabilizing NEK2 overcomes resistance to proteasome inhibition in multiple myeloma. The Journal of Clinical Investigation.2020 , IF=11.864.

【研究內(nèi)容】:每個(gè)骨髓瘤患者都有多個(gè)亞克隆,具有高或低染色體不穩(wěn)定性(CIN)特征的多個(gè)亞克隆共存會(huì)導(dǎo)致異質(zhì)性和耐藥性,導(dǎo)致疾病復(fù)發(fā)。作者通過串聯(lián)親和純化質(zhì)譜(TAP-MS)技術(shù),發(fā)現(xiàn)了CIN基因NEK2與脫泛素酶USP7結(jié)合。該結(jié)合阻止了NEK2泛素化并使其穩(wěn)定。研究發(fā)現(xiàn),使用NEK2或USP7抑制劑進(jìn)行靶向治療可能是骨髓瘤最有效的輔助治療方法。

使用技術(shù)串聯(lián)親和純化質(zhì)譜、TAP-MS實(shí)驗(yàn)外包


2.  Li X.et al: Proteomic analyses reveal distinct chromatin-associated and soluble transcription factor complexes.Molecular Systems Biology.2015 ,  IF=8.991.

【研究內(nèi)容】:轉(zhuǎn)錄因子(TF)是細(xì)胞信號(hào)通路的終極靶標(biāo)和執(zhí)行者。在這項(xiàng)研究中,作者對56個(gè)TF的可溶性和染色相關(guān)復(fù)合物進(jìn)行了蛋白質(zhì)組學(xué)分析,利用串聯(lián)親和純化和質(zhì)譜(TAP/MS)技術(shù)進(jìn)行純化,并鑒定其中的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。研究為大量的TF提供了有價(jià)值的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)資源,強(qiáng)調(diào)了TF形成不同位置特異性的蛋白質(zhì)復(fù)合物的一般原理,這些復(fù)合物與TF的不同調(diào)控和不同功能有關(guān)。

使用技術(shù)TAP MS技術(shù)服務(wù)、串聯(lián)親和純化-質(zhì)譜、串聯(lián)親和純化實(shí)驗(yàn)怎么做




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