cDNA克隆技術(shù)實(shí)驗(yàn)原理
基因調(diào)取和基因合成均是體外獲取目標(biāo)基因的方法。
基因調(diào)取:從細(xì)胞或組織中提取總DNA或總RNA后擴(kuò)增出目的基因;該方法獲得的基因是天然存在的,但由于個(gè)體差異,調(diào)取到的基因可能存在SNP,即調(diào)取到的序列與NCBI等數(shù)據(jù)庫登錄序列不完全一致。另外,當(dāng)樣本中目的基因含量較低時(shí),可能調(diào)取不成功。
全基因合成:通過化學(xué)合成的方法獲得目的DNA序列。該方法簡(jiǎn)單,快速,并且可以保證合成后的序列與您要求的序列完全一致,但當(dāng)片段太長(zhǎng)時(shí),合成費(fèi)用也相對(duì)較高。
cDNA克隆實(shí)驗(yàn)流程
3. 以cDNA為模板,采用設(shè)計(jì)好的引物進(jìn)行PCR,回收目的片段
4. 連接載體,轉(zhuǎn)化大腸桿菌細(xì)胞,進(jìn)行菌落PCR驗(yàn)證、酶切驗(yàn)證和測(cè)序
5. 測(cè)序結(jié)果分析和出具報(bào)告
基因調(diào)取/合成cDNA克隆服務(wù)信息
項(xiàng)目名稱 | 客戶提供 | 結(jié)果交付 | 實(shí)驗(yàn)周期 | 價(jià)格
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基因調(diào)取、合成 | 目標(biāo)基因序列 其他實(shí)驗(yàn)要求 | 1、基因載體質(zhì)粒約3ug 2、基因載體甘油菌1ml 3、原始測(cè)序文件和拼接文件
4、實(shí)驗(yàn)報(bào)告(全基因合成無報(bào)告) | 2-4周 |
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基因調(diào)取/合成服務(wù)優(yōu)勢(shì)*輝駿生物
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基因調(diào)取/合成檢測(cè)服務(wù)—客戶文章
【研究?jī)?nèi)容】:本研究利用基因表達(dá)/敲除、細(xì)胞功能檢測(cè),動(dòng)物實(shí)驗(yàn),雙熒光素酶分析等實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)人黑色素瘤中TLR4的表達(dá)與STAT3的激活/磷酸化呈正相關(guān),TLR4配體通過MYD88和TRIF激活黑色素瘤細(xì)胞中的STAT3,促進(jìn)了腫瘤的生長(zhǎng)。當(dāng)抑制黑色素瘤中STAT3的功能時(shí),TLR4激活產(chǎn)生的效應(yīng)減弱,說明STAT3激活對(duì)TLR4信號(hào)介導(dǎo)的黑色素瘤發(fā)展至關(guān)重要,為黑色素瘤的病理生理學(xué)提供了新的線索。
使用技術(shù):基因調(diào)取、載體構(gòu)建
【研究?jī)?nèi)容】:本研究通過基因過表達(dá)、雙熒光素酶等實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)LncRNA
ILF3-AS1在顳葉癲癇(TLE)患者的海馬和血清中水平升高,ILF3-AS1通過靶向miR-212誘導(dǎo)炎性細(xì)胞因子和MMP3、MMP9的表達(dá)。值得注意的是,針對(duì)ILF3-AS1/miR212/MMP3/9軸的治療策略可能是治療TLE的有效方法。
使用技術(shù):載體構(gòu)建實(shí)驗(yàn)、基因調(diào)取服務(wù)、cDNA克隆服務(wù)
【研究?jī)?nèi)容】:柯薩基病毒A16
(CV-A16)和A16 (CV-A6),以及腸病毒D68 (EV-D68)
是手足口?。℉FMD)和26種小兒呼吸道疾病的主要病因。作者通過基因表達(dá)、雙熒光素酶和免疫共沉淀(Co-IP)等實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),這三種病毒的3Cpro蛋白可以與宿主的線粒體抗病毒信號(hào)蛋白競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合MDA5,從而抑制MDA5下游的RLR信號(hào)通路中關(guān)鍵因子I型干擾素(IFN)的產(chǎn)生;此外,它還能降解NF-κB信號(hào)通路中的關(guān)鍵因子TAK1而導(dǎo)致NF-κB失活。本研究揭示了這三種病毒破壞宿主先天免疫應(yīng)答的新機(jī)制。
使用技術(shù):基因調(diào)取及表達(dá)實(shí)驗(yàn)外包、載體構(gòu)建技術(shù)
分子細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)
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