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實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介

miRNA pull down實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介


miRNA pull-down是研究目標(biāo)miRNA與其他RNA或RNA結(jié)合蛋白(RBPs)之間相互作用的技術(shù)。 

體外miRNA pull-down:首先合成生物素標(biāo)記的miRNA探針(也可以是pre-miRNA或pri-miRNA探針),在體外條件下將其結(jié)合到鏈霉親和素磁珠上,再與待測(cè)樣本裂解液孵育,捕獲與miRNA結(jié)合的其他RNA(如mRNA、lncRNA和circRNA)或RBPs;提取的RNA可以采用qPCR方法檢測(cè),洗脫的蛋白質(zhì)可以采用western-blot或質(zhì)譜(LC-MS/MS)技術(shù)檢測(cè)。 

體內(nèi)miRNA pull-down:將生物素標(biāo)記的miRNA探針轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,裂解細(xì)胞后,采用鏈霉親和素磁珠捕獲樣本裂解液中的生物素miRNA-RNA復(fù)合物;隨后,洗脫純化得到RNA,并進(jìn)行高通量測(cè)序或qPCR檢測(cè)。


輝駿生物10年科研服務(wù)經(jīng)驗(yàn),專(zhuān)業(yè)提供分子互作實(shí)驗(yàn)服務(wù),包括蛋白與蛋白、蛋白與DNA、蛋白與RNA、RNA與RNA的相互作用技術(shù),經(jīng)驗(yàn)豐富,實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定、可靠。

我公司自有分子、細(xì)胞和質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)平臺(tái),能執(zhí)行最優(yōu)的實(shí)驗(yàn)路線,對(duì)微量互作蛋白的質(zhì)譜鑒定有充足把控力,對(duì)后續(xù)功能分析有獨(dú)到見(jiàn)解。

我們不僅會(huì)提供專(zhuān)業(yè)的售前方案建議、而且售后技術(shù)支持將一直保持到文章發(fā)表,確保您安心進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)及投稿。

目前,客戶(hù)已在Nature子刊、Oncogene、Cell Research等高水平期刊成功發(fā)表大量高分文章(點(diǎn)擊查看客戶(hù)文獻(xiàn))。




miRNA pull down實(shí)驗(yàn)流程


輝駿生物miRNA pull down調(diào)取結(jié)合蛋白原理圖

圖一:miRNA pull-down調(diào)取結(jié)合蛋白原理圖


輝駿生物miRNA pull down調(diào)取結(jié)合RNA原理.png

圖二:miRNA pull down調(diào)取結(jié)合RNA原理圖





miRNA pull-down應(yīng)用背景


MicroRNA(miRNA)是真核生物中廣泛存在的一種長(zhǎng)約21~23個(gè)核苷酸的RNA分子。miRNA的產(chǎn)生也是一個(gè)高度調(diào)控的多步驟過(guò)程。首先,攜帶miRNA信息的基因被轉(zhuǎn)錄成初級(jí)miRNA(pri-miRNA),再被Drosha復(fù)合體剪切成具有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的前體miRNA(pre-miRNA),最后被Dicer復(fù)合體進(jìn)一步切割,產(chǎn)生成熟的miRNA。成熟的miRNA與Argonaute蛋白等組裝形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體(RISC),常常特異性結(jié)合靶RNA(例如mRNA、lncRNA、circRNA)并調(diào)控其表達(dá)。 


每個(gè)miRNA可以有多個(gè)靶基因,而幾個(gè)miRNAs也可以調(diào)節(jié)同一個(gè)基因,并且這種調(diào)控是動(dòng)態(tài)變化的。此外,從miRNA的生成、轉(zhuǎn)運(yùn)到發(fā)揮功能,都需要很多蛋白質(zhì)的參與。因此,研究miRNA與RNA、蛋白質(zhì)的結(jié)合對(duì)揭示很多生物學(xué)現(xiàn)象具有重要意義。

技術(shù)支持聯(lián)系
18927549347、13430303037




miRNA pulldown實(shí)驗(yàn)—輝駿生物服務(wù)內(nèi)容


 服務(wù)項(xiàng)目 服務(wù)內(nèi)容 結(jié)果交付 實(shí)驗(yàn)周期 客戶(hù)提價(jià)格

體外miRNA Pull-down qPCR

 合成生物素miRNA探針 探針合成報(bào)告 5-6周

 miRNA序列

 待測(cè)RNA序列

 實(shí)驗(yàn)樣本


點(diǎn)擊詢(xún)價(jià)
 qPCR檢測(cè)樣本中的待測(cè)靶RNA Input qPCR檢測(cè)結(jié)果

 miRNA pull-down捕獲miRNA-靶RNA復(fù)合體并檢測(cè)

(實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組)

 pull-down qPCR檢測(cè)結(jié)果

 pull-down實(shí)驗(yàn)報(bào)告

體內(nèi)miRNA Pull-down qPCR

 合成生物素miRNA探針 探針合成報(bào)告 7-8周

 miRNA序列

 待測(cè)RNA序列

 待轉(zhuǎn)染細(xì)胞及其培養(yǎng)方法



點(diǎn)擊詢(xún)價(jià)


 qPCR檢測(cè)樣本中的待測(cè)靶RNA

 Input qPCR檢測(cè)結(jié)果

 miRNA探針轉(zhuǎn)染細(xì)胞

 pull-down qPCR檢測(cè)結(jié)果

 pull-down實(shí)驗(yàn)報(bào)告

 miRNA pull-down捕獲miRNA-靶RNA復(fù)合體并檢測(cè)

(實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組)

體外miRNA Pull-down WB
 合成生物素miRNA探針 探針合成報(bào)告 5-6周

 miRNA序列

 待測(cè)RNA序列

 待測(cè)蛋白序列

 待測(cè)蛋白抗體
點(diǎn)擊詢(xún)價(jià)
 Western blot(WB)檢測(cè)樣本中的待測(cè)靶蛋白 Input WB檢測(cè)結(jié)果

 miRNA pull-down捕獲miRNA-靶蛋白復(fù)合體并檢測(cè)

(實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組)

 pull-down WB檢測(cè)結(jié)果

 pull-down實(shí)驗(yàn)報(bào)告
體外miRNA Pull-down MS 合成生物素miRNA探針 探針合成報(bào)告 6-7周

 miRNA序列

 實(shí)驗(yàn)樣本



點(diǎn)擊詢(xún)價(jià)


 miRNA pull-down捕獲miRNA-靶蛋白復(fù)合體

(實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組)

 pull-down產(chǎn)物SDS-PAGE圖

 pull-down實(shí)驗(yàn)報(bào)告
 LC-MS/MS檢測(cè)和數(shù)據(jù)分析

 質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果和報(bào)告

 互作蛋白篩選表格
 生物信息學(xué)分析(GO、KEGG pathway、String) 生物信息學(xué)分析結(jié)果和報(bào)告





miRNA Pull-down樣本要求


1. 送樣量要求

樣本類(lèi)型
miRNA pull down WB/qPCR建議送樣量miRNA pull down MS建議送樣量
動(dòng)物細(xì)胞
2*10e7個(gè)細(xì)胞/組(約2個(gè)10cm皿)3*10e7個(gè)細(xì)胞/組(約3個(gè)10cm皿)
動(dòng)物組織1g/組2g/組

▲注意:以上均為每組樣本的送樣量,如果實(shí)驗(yàn)和對(duì)照組用的樣本一致,此樣本量*2。詳細(xì)送樣指南可聯(lián)系輝駿生物索取。


2. 樣本運(yùn)輸要求

(1)樣本一定要做好標(biāo)記,應(yīng)用油性防凍記號(hào)筆或標(biāo)簽紙?jiān)诠苌献⒚鳂颖久Q(chēng)或編號(hào);

(2)樣本較多或需要分批做,要將樣本分裝;

(3)干冰取樣/運(yùn)輸;需要至少在送樣前一天通知我方。





miRNA Pull Down結(jié)果示例


輝駿生物miRNA pull down WB檢測(cè)圖(陽(yáng)性).jpg

miRNA pull down WB檢測(cè)圖(陽(yáng)性)


輝駿生物miRNA pull down qPCR檢測(cè)結(jié)果(陽(yáng)性)       輝駿生物miRNA pull down qPCR檢測(cè)結(jié)果(陽(yáng)性)

miRNA pull down qPCR檢測(cè)結(jié)果(陽(yáng)性)


技術(shù)支持聯(lián)系
18927549347、13430303037




miRNA pull-down參考文獻(xiàn)


 1. Chen X.W. et al: TDP-43 regulates cancer-associated microRNAs. Protein Cell 2018. (1區(qū),IF=21.1).

使用相關(guān)技術(shù):體外miRNA pull down WB




 2. Polypyrimidine tract-binding protein blocks miRNA-124 biogenesis to enforce its neuronal-specific expression in the mouse. PNAS. 2018. (1區(qū),IF=9.4).

使用相關(guān)技術(shù):體外pre-miRNA pull down WB技術(shù)服務(wù)

  3. Du A.S. et al: M6A-mediated upregulation of circMDK promotes tumorigenesis and acts as a nanotherapeutic target in hepatocellular carcinoma. Molecular Cancer. (1區(qū),IF=37.3).

使用相關(guān)技術(shù)體內(nèi) miRNA pull down qPCR實(shí)驗(yàn)







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