數(shù)據(jù)非依賴性掃描模式(Data-independent acquisition, DIA)是基于靜電場軌道阱Orbitrap帶來的一項(xiàng)全新的、全息式數(shù)據(jù)非依賴性采集定量技術(shù)，是近幾年來發(fā)展的一種新的質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集方式。該技術(shù)將傳統(tǒng)蛋白質(zhì)組的高通量和質(zhì)譜絕對定量MRM/PRM的精確定量及高重復(fù)性等優(yōu)點(diǎn)集于一體。
    
通過液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)（LC-MS/MS）將質(zhì)譜整個全掃描范圍分為若干個窗口，高速、循環(huán)地對每個窗口中的所有離子進(jìn)行選擇、碎裂及檢測，從而無遺漏、無差異地獲得樣本中所有離子的全部碎片信息；無需指定目標(biāo)肽段，掃描點(diǎn)數(shù)均勻，利用譜圖庫即可實(shí)現(xiàn)定性確證和定量離子篩選，并可實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)回溯。

基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)：疾病標(biāo)志物，發(fā)病機(jī)制，疾病分型等；

生物醫(yī)藥：藥物機(jī)理，藥效評價，藥物開發(fā)等；

農(nóng)林畜漁：抗逆脅迫，生長發(fā)育，耐藥，致病機(jī)理等。

1

近十年服務(wù)經(jīng)驗(yàn)，眾多服務(wù)案例，服務(wù)成果得到優(yōu)秀期刊認(rèn)可

2

對蛋白篩選與定量、低豐度蛋白鑒定方面有獨(dú)到見解，擅長針對客戶情況提出合適的方案建議

3

自有分子及細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)平臺，能有效制定并執(zhí)行最優(yōu)的實(shí)驗(yàn)路線

4

售后技術(shù)支持將一直保持到客戶發(fā)表文章，確?？蛻舭残倪M(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)及投稿

聯(lián)系技術(shù)支持

18927549347

聯(lián)系技術(shù)支持

18927549347

Bi F.F. et al: METTL9-SLC7A11 axis promotes hepatocellular carcinoma progression through ferroptosis inhibition. Cell Death Discov. 2023. IF=7. 使用技術(shù)：DIA全息掃描定量、dia實(shí)驗(yàn)檢測

蛋白組/代謝組實(shí)驗(yàn)

? iTRAQ 定量蛋白質(zhì)組學(xué)

? Label Free 實(shí)驗(yàn)檢測服務(wù)

? LC-MS/MS 蛋白質(zhì)譜鑒定

? DIA 全息掃描定量蛋白質(zhì)
? 廣泛靶向代謝組學(xué)

蛋白/核酸相互作用實(shí)驗(yàn)

? GST pull down

? RNA pull down

? DNA pull down

? Co-IP 免疫共沉淀

? TAP-MS串聯(lián)親和純化

分子細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

? 基因調(diào)取/合成 (cDNA克隆)

? 熒光定量PCR (qPCR)

? 載體構(gòu)建實(shí)驗(yàn)服務(wù)

? miRNA靶基因驗(yàn)證
? 慢病毒包裝

科研產(chǎn)品

? 哺乳動物細(xì)胞表達(dá)載體

? 人cDNA克隆庫

? 慢病毒表達(dá)載體

? 慢病毒干擾載體

抗體工程服務(wù)

? 單克隆抗體測序

? 抗體從頭測序

? 抗體表達(dá)服務(wù)

? 重組抗體表達(dá)

實(shí)驗(yàn)試劑盒

? RNA pull down 試劑盒

? GST pull down 試劑盒

? COIP 試劑盒

? Flag 試劑盒

輝駿實(shí)力

4899+客戶已添加微信獲取實(shí)驗(yàn)優(yōu)惠！

Jarrett D. et al:Multiplexed peptide analysis using data-independent acquisition and Skyline.

Nature protocols. 2015, IF=17.021

中文標(biāo)題：基于數(shù)據(jù)獨(dú)立采集和Skyline的多肽分析

運(yùn)用技術(shù)：DIA非標(biāo)定量蛋白質(zhì)組學(xué)

● 內(nèi)容概述

本研究描述了在Q-Exactive質(zhì)譜儀上使用數(shù)據(jù)獨(dú)立采集(DIA)在Skyline靶向蛋白質(zhì)組學(xué)環(huán)境下檢測和定量復(fù)雜混合物中的多肽。DIA對MS/MS光譜的系統(tǒng)獲取與DDA相反，DDA獲取的MS/MS光譜只適用于鑒定一組隨機(jī)采樣的多肽。與選擇性反應(yīng)監(jiān)測(SRM)類似，可以使用有針對性的色譜提取從DIA數(shù)據(jù)中定量多肽。與SRM不同，數(shù)據(jù)采集不限于預(yù)先確定的一組目標(biāo)肽。在該方案中，使用數(shù)據(jù)依賴采集(DDA)生成光譜庫，并從庫中所有肽的DIA數(shù)據(jù)中提取色譜圖。與SRM類似，DIA數(shù)據(jù)的定量是基于提取的MS/MS色譜圖曲線下的面積。此外，還詳細(xì)介紹了一種適用于DIA的基于目標(biāo)MS/MS采集的質(zhì)量控制方法。

● 方法流程

數(shù)據(jù)獨(dú)立獲取(DIA)是一種相對較新的基于質(zhì)譜的技術(shù)，用于系統(tǒng)收集串聯(lián)質(zhì)譜數(shù)據(jù)。DIA獲取的數(shù)據(jù)集被描述為樣本的“分子快照”，因?yàn)樵摂?shù)據(jù)可以查詢?nèi)魏慰蓹z測到的肽，既可以監(jiān)測多肽的存在，也可以監(jiān)測樣品中多肽豐度的變化。因此，DIA非常適合研究人員需要測量數(shù)百種(或更多)蛋白質(zhì)的應(yīng)用，或者研究人員希望在不需要獲取額外數(shù)據(jù)集的情況下靈活地研究多個假設(shè)的應(yīng)用。本研究描述了如何使用DIA獲取和分析用于肽分析的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。與選擇性反應(yīng)監(jiān)測(SRM)或平行反應(yīng)監(jiān)測(PRM)等靶向采集方法相比，DIA的方法設(shè)置更簡單，后者需要復(fù)雜的程序來測量約50個以上的肽。

DIA幾乎只用于“自下而上”的質(zhì)譜分析，即在分析之前使用蛋白水解酶(例如胰蛋白酶)將蛋白質(zhì)消化成多肽。與完整蛋白質(zhì)相比，合成的多肽降低了理化多樣性，簡化了樣品制備，提高了質(zhì)譜靈敏度(圖1)。消化后，肽通過反相高效液相色譜(RP-HPLC)分離，并通過電噴霧電離(ESI)接口直接發(fā)射到質(zhì)譜儀。在捕集儀器(如Q-Exactive)上，傳輸?shù)劫|(zhì)譜儀的離子在短時間內(nèi)被收集，并通過質(zhì)譜(MS)或串聯(lián)質(zhì)譜(MS/MS)進(jìn)行分析。

沒有“一刀切”的DIA方法。設(shè)計(jì)最佳DIA方法的一些關(guān)鍵考慮因素是樣品復(fù)雜性、色譜條件、所使用的質(zhì)譜儀以及所需的靈敏度。DIA方法的許多參數(shù)可能需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行調(diào)整。DIA方法的一些關(guān)鍵性能特征包括：MS/MS隔離寬度、色譜采樣率、M/Z覆蓋范圍、分辨率、質(zhì)量精度、AGC目標(biāo)和最大離子注入時間、樣品注射次數(shù)等。