名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 貨期 | 價(jià)格 |
ChainFree? Flag標(biāo)簽免疫共沉淀試劑盒(動物) | FI8801 | 12次/24次 | 現(xiàn)貨 | |
ChainFree? HA標(biāo)簽免疫共沉淀試劑盒(動物) | FI8806 | 12次/24次 | 現(xiàn)貨 | |
ChainFree? Myc標(biāo)簽免疫共沉淀試劑盒(動物) | FI8807 | 12次/24次 | 現(xiàn)貨 | |
ChainFree? GFP標(biāo)簽免疫共沉淀試劑盒(動物) | FI8808 | 12次/24次 | 現(xiàn)貨 | |
ChainFree? mCherry標(biāo)簽免疫共沉淀試劑盒(動物) | FI8809 | 12次/24次 | 現(xiàn)貨 | |
ChainFree? Flag標(biāo)簽免疫共沉淀試劑盒(植物) | FI8811 | 12次/24次 | 現(xiàn)貨 | |
ChainFree? HA標(biāo)簽免疫共沉淀試劑盒(植物) | FI8816 | 12次/24次 | 現(xiàn)貨 | |
ChainFree? Myc標(biāo)簽免疫共沉淀試劑盒(植物) | FI8817 | 12次/24次 | 現(xiàn)貨 | |
ChainFree? GFP標(biāo)簽免疫共沉淀試劑盒(植物) | FI8818 | 12次/24次 | 現(xiàn)貨 | |
ChainFree? mCherry標(biāo)簽免疫共沉淀試劑盒(植物) | FI8819 | 12次/24次 | 現(xiàn)貨 |
DNA重組技術(shù)使目標(biāo)蛋白帶上特定標(biāo)簽,表達(dá)的融合蛋白再采用標(biāo)簽抗體來檢測,為科學(xué)研究帶來了極大便利。常見的蛋白標(biāo)簽包括Flag、HA、Myc、V5等,這些標(biāo)簽分子量小,對融合蛋白的活性和細(xì)胞內(nèi)定位幾乎沒有影響。
針對不同樣本的需求,輝駿生物開發(fā)了分別針對植物和動物樣本的5款ChainFree?標(biāo)簽抗體免疫共沉淀試劑盒:
產(chǎn)品名稱 | 識別的標(biāo)簽序列 | 磁珠偶聯(lián)抗體 |
ChainFree? Anti-Flag CoIP試劑盒 | DYKDDDDK | 優(yōu)化并重組表達(dá)的無輕、重鏈的Flag抗體 |
ChainFree? Anti-HA CoIP試劑盒 | YPYDVPDYA | 優(yōu)化并重組表達(dá)的無輕、重鏈的HA抗體 |
ChainFree? Anti-Myc CoIP試劑盒 | EQKLISEEDL | 優(yōu)化并重組表達(dá)的無輕、重鏈的Myc抗體 |
ChainFree? Anti-GFP CoIP試劑盒 | GFP或EGFP綠色熒光蛋白 | 優(yōu)化并重組表達(dá)的無輕、重鏈的GFP抗體 |
ChainFree? Anti-mCherry CoIP試劑盒 | mCherry紅色熒光蛋白 | 優(yōu)化并重組表達(dá)的無輕、重鏈的mCherry抗體 |
實(shí)驗(yàn)前先將Flag標(biāo)簽、HA標(biāo)簽或GFP標(biāo)簽等與目標(biāo)蛋白在樣本中融合表達(dá)。裂解樣本后,將標(biāo)簽抗體磁珠加入樣本中,標(biāo)簽抗體與目標(biāo)融合蛋白及其結(jié)合蛋白形成復(fù)合體,去除未結(jié)合的蛋白后,可以采用多種方法洗脫蛋白質(zhì)。分離的蛋白產(chǎn)物既可以用Western blot檢測已知蛋白,也可以用質(zhì)譜(LC-MS/MS)鑒定未知蛋白。
蛋白-蛋白間的相互作用是蛋白質(zhì)發(fā)揮生物學(xué)功能的主要模式,蛋白質(zhì)會通過結(jié)合不同的伙伴來行駛不同的功能,形成復(fù)雜的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)。CO-IP試劑盒采用Flag抗體磁珠、HA抗體磁珠、Myc抗體磁珠、GFP抗體磁珠或mCherry抗體磁珠捕獲樣本中天然結(jié)合的Flag融合蛋白、HA融合蛋白、Myc融合蛋白、GFP融合蛋白或mCherry融合蛋白,以及它們的互作蛋白,不需要購買誘餌蛋白的IP級別抗體,只需要在細(xì)胞或組織中表達(dá)融合flag標(biāo)簽的誘餌蛋白,即可以利用標(biāo)簽抗體完成內(nèi)源性Co-IP實(shí)驗(yàn)。以下列舉了可應(yīng)用COIP試劑盒的幾個(gè)研究方向:
1. 病毒、細(xì)菌等病原體侵染宿主細(xì)胞的機(jī)制;
2. 酶和底物的作用機(jī)制;
3. 天然狀態(tài)蛋白調(diào)控復(fù)合體的研究。
ChainFree?系列CoIP試劑盒-輝駿生物產(chǎn)品優(yōu)勢
1. 無抗體輕重鏈污染:IP復(fù)合物無論采用非變性洗脫還是變性洗脫,均不會出現(xiàn)抗體的輕、重鏈污染問題。
2. 親和力強(qiáng):低nM級別親和力,輕松應(yīng)對低拷貝基因,或難轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。
3. 特異性強(qiáng):抗體磁珠通過了20株以上的空白細(xì)胞系檢測,不易產(chǎn)生非特異吸附。
4. 結(jié)合量高:每10 μL抗體磁珠可結(jié)合約10~15 μg重組蛋白。
5. 兼容性好:無論標(biāo)簽在誘餌蛋白的N端或C端,都可以識別。
6. 穩(wěn)定性好:通過了45℃高溫測試。
輝駿生物ChainFree?標(biāo)簽抗體磁珠與其他同類產(chǎn)品對比圖
Western-Blot結(jié)果顯示:輝駿生物的ChainFree? 磁珠對誘餌蛋白的親和力強(qiáng),IP效果優(yōu)于sigma產(chǎn)品,遠(yuǎn)高于國產(chǎn)同類磁珠效果,并且不會產(chǎn)生抗體輕重鏈污染。
輝駿生物ChainFree?標(biāo)簽抗體磁珠穩(wěn)定性測試圖
Western-Blot結(jié)果顯示:ChainFree? 磁珠在45℃條件下放置7天,穩(wěn)定性幾乎不受影響。
試劑名稱 | 體積(12 Tests) | 體積(24 Tests) | 保存條件 |
ChainFree? Anti-Flag/HA/Myc/GFP/mCherry磁珠 | 250 μL | 500 μL | 4 ℃ |
裂解緩沖液 | 7 mL | 14 mL | 4 ℃ |
漂洗液 | 25 mL | 50 mL | 4 ℃ |
洗脫緩沖液 | 650 μL | 1.3 mL | -20 ℃ |
蛋白酶抑制劑 | 190 μL | 380 μL | -20 ℃ |
Flag/HA/Myc/GFP/mCherry標(biāo)簽免疫共沉淀試劑盒使用流程簡述
1. 裂解樣本;
2. 樣本裂解液與Flag磁珠(或HA磁珠、V5磁珠)孵育;
3. 漂洗、洗脫得到目標(biāo)蛋白及其互作蛋白復(fù)合物。
Anti-Flag CoIP試劑盒使用案例
Co-IP western-blot結(jié)果圖
1. Li H.B. et al: The plant ESCRT component FREE1 shuttles to the nucleus to attenuate abscisic acid signaling. Nature Plants. 2019,IF=17.352. |
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