當(dāng)前位置：首頁(yè) > 科研服務(wù) > 分子/細(xì)胞生物學(xué) > 細(xì)胞生物學(xué) > miRNA靶基因驗(yàn)證（雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)）

熒光素酶 (Luciferase)報(bào)告基因系統(tǒng)是以熒光素(luciferin)為底物來檢測(cè)熒光素酶活性的一種報(bào)告系統(tǒng)。雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)指的是在同一細(xì)胞中同時(shí)表達(dá)兩種熒光素酶——螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶，利用一個(gè)報(bào)告基因作為內(nèi)參來校正另一個(gè)報(bào)告基因，從而減少細(xì)胞活性和轉(zhuǎn)染效率對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

雙熒光素酶報(bào)告基因可用于檢測(cè)啟動(dòng)子活性，或者轉(zhuǎn)錄因子和啟動(dòng)子的結(jié)合。

miRNA靶基因驗(yàn)證技術(shù)原理

miRNAs常與靶基因的非翻譯區(qū)（常為3’UTR）結(jié)合，從而抑制整個(gè)mRNA的翻譯。將待測(cè)的miRNA結(jié)合位點(diǎn)序列（靶基因3‘UTR全長(zhǎng)或結(jié)合位點(diǎn)附近500bp序列）構(gòu)建到熒光素酶基因的下游，將該質(zhì)粒與miRNA mimics共轉(zhuǎn)染待測(cè)細(xì)胞；如果miRNA能夠結(jié)合待測(cè)序列，則會(huì)抑制上游熒光素酶表達(dá)，使熒光素酶底物發(fā)光減弱；根據(jù)化學(xué)發(fā)光值判斷miRNA是否與待測(cè)序列結(jié)合。

miRNA靶基因驗(yàn)證應(yīng)用范圍

1.miRNA與靶基因結(jié)合驗(yàn)證

2.ceRNA機(jī)制研究：當(dāng)加入競(jìng)爭(zhēng)性的lncRNA或circRNA時(shí)，可以通過觀察Luciferase活性的變化判斷mRNA-miRNA-LncRNA（或circRNA）三者是否存在ceRNA調(diào)控機(jī)制。

miRNA靶基因驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)技術(shù)流程

熒光素酶載體構(gòu)建

細(xì)胞轉(zhuǎn)染

熒光素酶檢測(cè)

數(shù)據(jù)分析

**miRNA靶基因驗(yàn)證技術(shù)服務(wù)*輝駿優(yōu)勢(shì)**

化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)，反應(yīng)非常靈敏，可以有效的檢測(cè)體內(nèi)微小的調(diào)控作用。

操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)結(jié)果直觀。

miRNA靶基因驗(yàn)證服務(wù)信息

項(xiàng)目名稱	客戶提供	結(jié)果交付	實(shí)驗(yàn)周期
miRNA靶基因驗(yàn)證	細(xì)胞樣本實(shí)驗(yàn)信息表（miRNA序列，3’UTR序列或靶點(diǎn)序列，細(xì)胞培養(yǎng)信息等）	報(bào)告基因載體（野生和突變型）雙熒光素酶檢測(cè)結(jié)果實(shí)驗(yàn)報(bào)告	5-6周（不含細(xì)胞培養(yǎng)周期）
ceRNA研究	細(xì)胞樣本實(shí)驗(yàn)信息表（miRNA序列，3’UTR序列或靶點(diǎn)序列，lncRNA或circRNA序列，細(xì)胞培養(yǎng)信息等）	報(bào)告基因載體（野生和突變型）lncRNA或circRNA表達(dá)載體雙熒光素酶檢測(cè)結(jié)果實(shí)驗(yàn)報(bào)告	5-6周（不含細(xì)胞培養(yǎng)周期）

添加技術(shù)員微信溝通實(shí)驗(yàn)

18927549347

miRNA靶基因驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)-客戶文章

Ma L. et al: miR-9, a MYC/MYCN-activated microRNA, regulates E-cadherin and cancer metastasis. Nat Cell Biol. 2010, IF=28.824

【研究?jī)?nèi)容】：本研究發(fā)現(xiàn)miR-9在乳腺癌中上調(diào)，基因表達(dá)和雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)miR-9通過直接靶向編碼E-cadherin蛋白的mRNA“CDH1“來下調(diào)其表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性和侵襲性增加，進(jìn)而激活β-catenin信號(hào)，導(dǎo)致VEGF表達(dá)的升高。同時(shí)，ChIP實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)MYC和MYCN可以結(jié)合miR-9-3在基因組中的位點(diǎn)從而激活miR-9。這些發(fā)現(xiàn)揭示了miR-9促進(jìn)癌癥轉(zhuǎn)移的一個(gè)新的調(diào)控信號(hào)通路。

使用技術(shù)：雙熒光素酶（Luc）實(shí)驗(yàn)、基因過表達(dá)/干擾檢測(cè)、ChIP技術(shù)服務(wù)

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Sun YQ. et al: Long non-coding RNA HOTTIP promotes BCL-2 expression and induces chemoresistance in small cell lung cancer by sponging miR-216a.Cell Death Dis. 2018, IF= 8.469.

【研究?jī)?nèi)容】：本研究發(fā)現(xiàn)一種lncRNA“HOTIP“與小細(xì)胞肺癌（SCLC）的化療敏感性、癌細(xì)胞增殖和患者不良預(yù)后有關(guān)。通過miRNA芯片和雙熒光素酶確定了HOTIP可以結(jié)合miR-216a，之后又采用雙熒光素酶檢測(cè)、RNA pull down MS和RIP等實(shí)驗(yàn)，確定了他們?nèi)唛g的ceRNA調(diào)控機(jī)制：HOTIP通過結(jié)合miR-216a來減輕其對(duì)抗凋亡因子BCL-2的抑制作用。這些成果闡述了HOTIP在小細(xì)胞肺癌進(jìn)展中的新作用。

使用技術(shù)：雙熒光素酶檢測(cè)服務(wù)、RNA pull down MS實(shí)驗(yàn)

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