產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 儲(chǔ)存條件 | 其他 |
Glutathione Agarose Resin (GST標(biāo)簽蛋白瓊脂糖純化樹脂) | FI8304-1mL | 4℃(避免凍存),2年 | |
Glutathione Agarose Resin (GST標(biāo)簽蛋白瓊脂糖純化樹脂) | FI8304-5mL | 4℃(避免凍存),2年 |
GST標(biāo)簽蛋白瓊脂糖純化樹脂是一種將還原型谷胱甘肽(Glutathione)鍵合在瓊脂糖微球上形成的親和層析分離介質(zhì)。該產(chǎn)品保留了天然多糖化合物極好的親水性及大網(wǎng)架結(jié)構(gòu),與生物活性大分子有很好的相容性,具有高動(dòng)態(tài)吸附容量,快流速操作等特點(diǎn),用于谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記蛋白(GST 融合蛋白)、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GST)和谷胱甘肽依賴蛋白的分離純化。
基質(zhì) | 高度交聯(lián)的 4%瓊脂糖凝膠 |
粒徑 | 45-165 μm |
耐壓 | 0.3 Mpa |
載量 | >40 mg GST標(biāo)簽融合蛋白 / mL 基質(zhì) |
儲(chǔ)存緩沖液 | 20%乙醇 |
1. 樣本準(zhǔn)備(以大腸桿菌表達(dá)的蛋白純化為例)
(1)挑取單菌落到含有適合抗性的LB培養(yǎng)基中,根據(jù)載體說明加入相應(yīng)的誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)相應(yīng)的時(shí)間。
(2)表達(dá)結(jié)束后,將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)至離心瓶,7000 rpm,離心15 min,收集菌體,然后加入菌液體積1/10的裂解緩沖液(添加PMSF,終濃度為1 mM),也可同時(shí)加入其他蛋白酶抑制劑,但不能影響目的蛋白與樹脂的結(jié)合。
(3)之后加入溶菌酶,使其工作濃度為1 mg/mL。
注:如果表達(dá)的宿主細(xì)胞內(nèi)含pLysS或pLysE,可以不加入溶菌酶。
(4)將菌體沉淀懸浮起來(如果菌液濃度高,可考慮加入10 μg/mL RNase A和5 μg/mL DNase I),混勻,置于冰上超聲破碎細(xì)胞,至菌液基本保持澄清。
(5)收集上述澄清蛋白液至離心管中,10000 rpm,4℃離心20~30 min。取上清,置于冰上備用或 - 20℃保存。
2. GST標(biāo)簽融合蛋白純化
(1) 根據(jù)蛋白表達(dá)量取適量體積的 GST純化樹脂至尖底離心管中,加入5倍樹脂體積的漂洗緩沖液,顛倒混勻30次,500 g離心5 min,棄上清。
(2) 重復(fù)漂洗一次,500 g離心5 min,棄上清。
(3) 向樹脂中加入含GST融合蛋白的大腸桿菌裂解液(總體積不要超過離心管體積的2/3),放混勻儀上4 ℃孵育2~4 h。
(4) 4 ℃ 500 g離心5 min,棄上清。
(5) 加入10倍樹脂體積漂洗緩沖液,顛倒混勻30次,4 ℃ 500g離心5 min,棄上清;重復(fù)該漂洗操作兩次,500 g離心5 min,棄上清。
3. 洗脫
(1) SDS-PAGE上樣緩沖液洗脫法(變性洗脫法):得到的蛋白樣品適合SDS-PAGE電泳或Western Blot檢測。加入50 μL 2×SDS-PAGE上樣緩沖液,95oC加熱5分鐘。4 ℃ 12000 g離心 5 min,收集上清至新的離心管中。
(2) 非變性洗脫法:洗脫后的蛋白保持原有的生物活性,便于后續(xù)檢測(例如SDS-PAGE、Western-blot、質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)等)。每10 μL樹脂,加入10 μL洗脫緩沖液,渦旋震蕩20 s,放混勻儀上室溫洗脫10~15 min,渦旋震蕩20 s;4 ℃ 12000 g離心 5 min,收集上清至新的離心管中,- 80℃保存或直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究使用,不得用于臨床診斷或治療。
2. 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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