免疫共沉淀（Co-IP）* 實驗原理

結(jié)合了抗體的磁珠或樹脂（Beads）與樣本裂解液孵育，通過”抗原-抗體“之間的免疫作用，誘餌蛋白被吸附在Beads上，與此同時，誘餌蛋白的互作蛋白，也一起“共沉淀”到Beads上。洗滌去掉未結(jié)合的蛋白后，再用洗脫緩沖液將互作蛋白復(fù)合物從Beads上洗脫下來，得到免疫共沉淀（Co-IP）產(chǎn)物。Co-IP產(chǎn)物既可以用Western Blot檢測已知蛋白，也可以用質(zhì)譜鑒定未知蛋白。

當(dāng)沒有合適的誘餌蛋白抗體時，還可以通過表達融合了Flag標簽的誘餌蛋白，利用Flag標簽抗體做免疫沉淀。即樣本過表達Flag-Bait，經(jīng)裂解后與anti-Flag珠子孵育，誘餌融合蛋白與Beads結(jié)合，其互作蛋白“共沉淀”到Beads上，再經(jīng)洗滌、洗脫后，用WB或質(zhì)譜檢測。

輝駿生物10年科研服務(wù)經(jīng)驗，專業(yè)提供分子互作實驗服務(wù)，包括蛋白與蛋白、蛋白與DNA、蛋白與RNA、RNA與RNA的相互作用技術(shù)，經(jīng)驗豐富，實驗結(jié)果穩(wěn)定、可靠。

我公司自有分子、細胞和質(zhì)譜實驗平臺，能執(zhí)行最優(yōu)的實驗路線，對微量互作蛋白的質(zhì)譜鑒定有充足把控力，對后續(xù)功能分析有獨到見解。

我們不僅會提供專業(yè)的售前方案建議、而且售后技術(shù)支持將一直保持到文章發(fā)表，確保您安心進行下游實驗及投稿。

目前，客戶已在Nature子刊、Oncogene、Cell Research等高水平期刊成功發(fā)表大量高分文章（點擊查看客戶文獻）。

免疫共沉淀（Co-IP）* 實驗流程

CoIP實驗服務(wù)步驟流程_免疫共沉淀coip檢測_Co-IP實驗代做服務(wù)價格費用
內(nèi)源蛋白抗體免疫共沉淀CoIP實驗步驟

標簽抗體免疫共沉淀CoIP實驗流程

免疫共沉淀（Co-IP）* 應(yīng)用背景

蛋白質(zhì)之間相互作用是其發(fā)揮生物學(xué)功能的主要模式，蛋白質(zhì)會通過結(jié)合不同的伙伴來行駛不同的功能，形成復(fù)雜的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)。常見的蛋白互作研究方法主要有：免疫共沉淀（Co-IP）、pull down、酵母雙雜交、熒光雙分子互補（BiFC）、熒光共定位等。這些方法相互補充，通過多種方法共同驗證蛋白質(zhì)間的相互作用，能更大程度的避免假陽性結(jié)果。

免疫共沉淀Co-IP

Co-IP技術(shù)采用抗體捕獲樣本中的目標蛋白及其互作蛋白復(fù)合物，反應(yīng)的是體內(nèi)真實的生理結(jié)合，但不能顯示這些相互作用是直接還是間接的；另外合適的免疫共沉淀抗體是決定實驗成功的關(guān)鍵，有些蛋白沒有合適的IP抗體，無法進行內(nèi)源性Co-IP實驗；通過構(gòu)建帶標簽的表達載體，使目標蛋白與標簽融合表達，再借助標簽抗體即可完成Co-IP實驗，但需要注意合適的轉(zhuǎn)基因方法又是影響該方法成功的關(guān)鍵。

pull down

pull down技術(shù)將目標蛋白進行體外原核表達，使標簽蛋白（GST或His等）與目標蛋白融合表達，借助標簽的親和介質(zhì)將目標蛋白純化出來，可以不受抗體、物種限制，比較輕松的獲得目標蛋白的結(jié)合蛋白，還可以通過外源同時表達目標蛋白和待測蛋白，確定它們是否發(fā)生直接的相互作用，但該方法無法得知體內(nèi)真實的結(jié)合情況。

酵母雙雜交

酵母雙雜交技術(shù)是比較古老的一種技術(shù)，將目標蛋白和待測蛋白與GAL4 的兩個結(jié)構(gòu)域BD和AD融合表達，在酵母細胞中，2個蛋白的結(jié)合使得BD和AD在空間上靠近，從而激活報告基因lacZ的表達。但是由于受試蛋白都需要和 AD/BD 結(jié)構(gòu)域形成融合蛋白，空間構(gòu)象可能改變；另外假陽性率也比較高。

熒光雙分子互補（BiFC）

熒光雙分子互補（BiFC）技術(shù)將目標蛋白和待測蛋白分別與GFP的兩個片段融合表達，轉(zhuǎn)染細胞后，2個蛋白的結(jié)合使得GFP兩個片段空間上靠近，從而發(fā)出綠色熒光，該技術(shù)觀測直觀，操作簡便，但空間分辨率大約 250nm，對于蛋白質(zhì)相互作用來說依然是個相當(dāng)遠的距離，因此位置上靠近但并未結(jié)合的蛋白也可能顯示陽性結(jié)果，假陽性率較高；另外該技術(shù)可以驗證蛋白間的相互作用，但不能篩選未知互作蛋白。

熒光共定位

熒光共定位技術(shù)依靠熒光確定蛋白質(zhì)具有相同定位，用于輔助證明而非直接證明細胞內(nèi)蛋白間的相互作用。

技術(shù)支持聯(lián)系

18927549347、13430303037

**免疫共沉淀Co-IP * 輝駿服務(wù)內(nèi)容**

服務(wù)項目	服務(wù)內(nèi)容	結(jié)果交付	實驗周期	客戶提供	價格
Co-IP WB （驗證型）	樣本質(zhì)檢（Western blot檢測誘餌蛋白和待測蛋白）	樣本的誘餌蛋白Western blot檢測圖樣本的待測蛋白Western blot檢測圖	3-4周	實驗樣本誘餌蛋白的IP級抗體待測蛋白抗體實驗信息表	點擊詢價
	Co-IP調(diào)取誘餌蛋白及其互作蛋白（2組：實驗組、對照組）	IP產(chǎn)物的誘餌蛋白Western blot檢測圖 IP產(chǎn)物的待測蛋白Western blot檢測圖 CoIP實驗報告
Co-IP MS （篩選型）	樣本質(zhì)檢（Western blot檢測誘餌蛋白）	樣本的誘餌蛋白Western blot檢測圖	6-7周	實驗樣本誘餌蛋白的IP級抗體實驗信息表	點擊詢價
	Co-IP調(diào)取誘餌蛋白及其互作蛋白（2組：實驗組、對照組）	IP產(chǎn)物的誘餌蛋白Western blot檢測圖 CoIP實驗服務(wù)報告
	IP產(chǎn)物的質(zhì)譜檢測及數(shù)據(jù)分析	質(zhì)譜（LC-MS/MS）檢測結(jié)果及報告互作蛋白篩選表格生物信息學(xué)分析結(jié)果和報告

免疫共沉淀CoIP * 樣本要求

樣本類型	COIP-WB 建議送樣量	COIP-MS 建議送樣量
動物細胞	3*10e7個細胞/組（約3個10cm皿）	5*10e7個細胞/組（約5個10cm皿）
動物組織	1g/組	2g/組
植物葉片	2g/組	4g/組
植物根或果實	4g/組	8g/組
菌體	50ul菌體沉淀/組	100ul菌體沉淀/組

▲注意：這里列出的均為每組樣本的送樣量，如果實驗和對照組用的樣本一致，此樣本量*2。詳細送樣指南可聯(lián)系輝駿生物客服或銷售索取。

保存及運輸：-80℃保存，干冰取樣/運輸，至少在送樣前2天通知我司。

免疫共沉淀Co-IP * 結(jié)果示例

Co-IP WB：誘餌蛋白和待測蛋白Western blot檢測圖（陽性）

免疫共沉淀Coip實驗服務(wù)結(jié)果圖分析

Co-IP MS：誘餌蛋白Western blot檢測圖

Co-IP試驗外包代做結(jié)果圖分析

Co-IP MS：質(zhì)譜檢索表格（部分展示）

pull down生信分析結(jié)果.jpg

Co-IP MS：互作蛋白生信分析結(jié)果（部分展示）

技術(shù)支持聯(lián)系

18927549347、13430303037

免疫共沉淀（Co-IP）服務(wù)案例—客戶文章解析

Jiang S.Y. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP.

Cancer Research. 2019. (中科院1區(qū)，IF=13.312).

膽固醇通過APMAP抑制EGFR降解誘導(dǎo)前列腺癌細胞轉(zhuǎn)移

研究概述

轉(zhuǎn)移性前列腺癌具有很高的致命性。已有報道表明，膽固醇與前列腺癌的發(fā)展有關(guān)；前期研究發(fā)現(xiàn)，膽固醇可以誘導(dǎo)前列腺癌細胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT），但其作用及潛在機制尚不清楚。本研究證明膽固醇介導(dǎo)APMAP上調(diào)，APMAP通過與EGFR競爭結(jié)合EPS15R，進而抑制EGFR降解，激活ERK1/2通路，促進前列腺癌細胞EMT；提出APMAP可能是一種關(guān)鍵的調(diào)節(jié)劑，為高脂肪飲食、肥胖和癌癥轉(zhuǎn)移之間提供了聯(lián)系。

研究路線

細胞功能實驗證實膽醇誘導(dǎo)前列腺癌細胞EMT的發(fā)生依賴于ERK1/2的激活

RNA-seq、蛋白組學(xué)等實驗篩選和驗證與膽固醇有關(guān)的差異基因和蛋白，確定ERK1/2的上游凋節(jié)因子“ APMAI和“"EGFR”作為后續(xù)研究目標

APMAP基因敵除后的RNA-seq結(jié)果及其細胞實驗均顯示APMAP和膽固醇可能有相似的功能

APMAP和EGFR的表達關(guān)系實驗表明 APMAP通過調(diào)節(jié)EGFR參與膽固醇誘導(dǎo)的EMT過程

免疫共沉淀Co-IP結(jié)合質(zhì)譜實驗找到 APMAP的互作蛋白EPS15R

免疫熒光結(jié)果顯示膽固醇誘導(dǎo)使EPS15R和APMAP的作用增強，EPS15R與EGFR解離,進而抑制EGFR降解

臨床樣本分析APMAP與前列腺癌的關(guān)系

免疫共沉淀（Co-IP） * 客戶文章

1. Li H.B. et al: The plant ESCRT component FREE1 shuttles to the nucleus to attenuate abscisic acid signaling. Nature Plants. 2019，IF=17.352.
【研究內(nèi)容】：客戶發(fā)現(xiàn)，作為內(nèi)體蛋白分選轉(zhuǎn)運復(fù)合體成分之一的FREE1基因，受到脫落酸刺激時候會發(fā)生磷酸化并移位到細胞核?？蛻衾媒湍鸽p雜交技術(shù)找到兩個核蛋白ABF4 and ABI5會與FREE1結(jié)合，免疫共沉淀CoIP實驗進一步證實了FREE與這兩個蛋白的互作。后續(xù)實驗表明，F(xiàn)REE1通過抑制ABF4、ABI5對下游基因的調(diào)控能力，參與了脫落酸信號通路。
使用相關(guān)技術(shù)：質(zhì)譜鑒定、免疫共沉淀co-ip、Co-IP MS實驗

2. Jiang, S. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP. Cancer Research.2019，IF= 13.312.
【研究內(nèi)容】：客戶利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，篩選出膽固醇致前列腺癌發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)變（EMT）的重要基因APMAP和EGFR。通過在前列腺癌細胞表達3*Flag-APMAP基因，并利用免疫共沉淀CoIP及質(zhì)譜鑒定技術(shù)，客戶發(fā)現(xiàn)EPS15R可與APMAP結(jié)合。進一步的研究證實，體內(nèi)EPS15R-APMAP復(fù)合物通過EGFR致使細胞發(fā)生EMT。
使用相關(guān)技術(shù)：蛋白質(zhì)組學(xué)、質(zhì)譜鑒定、免疫共沉淀CoIP

3. Huang C.Y. et al: UBAP2L arginine methylation by PRMT1 modulates stress granule assembly. Cell Death Differ. 2020 , IF=12.067.
【研究內(nèi)容】：前期研究表明UBAP2L蛋白參與應(yīng)激顆粒形成?？蛻粼谶@項研究中，用免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜等技術(shù)，發(fā)現(xiàn)PRMT1甲基化UBAP2L，UBAP2L蛋白并且和另外三個應(yīng)激顆粒形成有關(guān)的重要蛋白有相互作用。這些蛋白復(fù)合物介導(dǎo)了應(yīng)激顆粒的形成。
使用相關(guān)技術(shù)：coip技術(shù)服務(wù)、質(zhì)譜鑒定、修飾位點鑒定

免疫共沉淀（CoIP）* 輝駿服務(wù)優(yōu)勢

近十年服務(wù)經(jīng)驗，服務(wù)客戶眾多，案例發(fā)表在Nature Cell Biology、Nature Plants、Cancer Research等知名期刊上

對蛋白互作的篩選鑒定理解深刻，擅長針對客戶具體情況提出合適的方案建議

自有分子及細胞生物實驗平臺，能有效制定并執(zhí)行最優(yōu)的實驗路線

自有蛋白質(zhì)組學(xué)平臺，對微量CoIP實驗產(chǎn)物的質(zhì)譜鑒定有十足的把控能力，對后續(xù)的生物信息分析有獨到的見解

售后技術(shù)支持將一直保持到客戶發(fā)表文章，確?？蛻舭残拿庖吖渤恋硐掠螌嶒灱巴陡?/span>

輝駿實力

輝駿生物提供的Co-IP免疫共沉淀服務(wù)分為以下兩種：

1. Co-IP WB，用于檢測某樣本中的誘餌蛋白和待測蛋白是否存在相互作用；

2. Co-IP MS，用于篩選某樣本中的誘餌蛋白與哪些蛋白具有相互作用。

Co-IP（免疫共沉淀）檢測服務(wù)
服務(wù)項目	服務(wù)內(nèi)容	結(jié)果交付	實驗周期	客戶提供	價格
Co-IP WB	Western blot檢測樣本（input）中的誘餌蛋白和待測蛋白	Western blot檢測圖	3-4周	1、實驗樣本 2、誘餌蛋白的IP級抗體 3、待測蛋白抗體 4、實驗信息表（樣本信息、抗體信息、誘餌蛋白和待測蛋白序列）	點擊詢價
	Co-IP調(diào)取誘餌蛋白及其互作蛋白（2組：實驗組、對照組）	CoIP實驗報告
	Western blot檢測Co-IP產(chǎn)物中的誘餌蛋白和待測蛋白	Western blot檢測圖
Co-IP MS	Western blot檢測樣本（input）中的誘餌蛋白	Western blot檢測圖	5-6周	1、實驗樣本 2、誘餌蛋白的IP級抗體 3、實驗信息表（樣本信息、抗體信息、誘餌蛋白序列）	點擊詢價
	Co-IP調(diào)取誘餌蛋白及其互作蛋白（2組：實驗組、對照組）	CoIP實驗服務(wù)報告
	Western blot檢測Co-IP產(chǎn)物中的誘餌蛋白	Western blot檢測圖
	LC-MS/MS定性檢測Co-IP產(chǎn)物的蛋白、篩選實驗組獨有蛋白（潛在互作蛋白）	質(zhì)譜檢索表格、互作蛋白篩選表格、檢測報告
	針對互作蛋白做生物信息學(xué)分析（GO、KEGG pathway、String）	生物信息學(xué)分析結(jié)果和報告	1周

加技術(shù)專員微信了解Co-IP實驗服務(wù)排期、優(yōu)惠等

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CoIP實驗技術(shù)服務(wù)樣本要求

1. 送樣量要求

樣本類型	Co-IP WB 建議送樣量	Co-IP MS 建議送樣量
動物細胞	3*10e7個細胞/組（約3個10cm皿）	5*10e7個細胞/組（約5個10cm皿）
動物組織	1g/組	2g/組
植物葉片	2g/組	4g/組
植物根或果實	4g/組	8g/組
菌體	50ul菌體沉淀/組	100ul菌體沉淀/組

▲注意：這里列出的均為每組樣本的送樣量，如果實驗和對照組用的樣本一致，此樣本量*2。詳細送樣指南可聯(lián)系輝駿生物客服或銷售索取。

2. 樣本保存和運輸要求：

（1）樣本用PBS清洗干凈后，離心去掉液體，先放入液氮中速凍，再轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱中保存；

（2）樣本一定要做好標記，應(yīng)用油性防凍記號筆或標簽紙在管上注明樣本名稱或編號；

（3）樣本較多或需要分批做，要將樣本分裝；

（4）干冰取樣/運輸；需要至少在送樣前一天通知我方。

免疫共沉淀coip實驗結(jié)果圖例

Co-IP WB：誘餌蛋白和待測蛋白Western blot檢測圖（陽性）

免疫共沉淀Coip實驗服務(wù)結(jié)果圖分析

Co-IP MS：誘餌蛋白Western blot檢測圖

Co-IP試驗外包代做結(jié)果圖分析

Co-IP MS：質(zhì)譜檢索表格（部分展示）

Co-IP（免疫共沉淀）實驗服務(wù)客戶文章

3. Huang C.Y. et al: UBAP2L arginine methylation by PRMT1 modulates stress granule assembly. Cell Death Differ. 2020 , IF=12.067.
【研究內(nèi)容】：前期研究表明UBAP2L蛋白參與應(yīng)激顆粒形成?？蛻粼谶@項研究中，用免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜等技術(shù)，發(fā)現(xiàn)PRMT1甲基化UBAP2L，UBAP2L蛋白并且和另外三個應(yīng)激顆粒形成有關(guān)的重要蛋白有相互作用。這些蛋白復(fù)合物介導(dǎo)了應(yīng)激顆粒的形成。
使用相關(guān)技術(shù)：CoIP技術(shù)服務(wù)、質(zhì)譜鑒定、修飾位點鑒定

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免疫共沉淀（Co-IP）試劑盒

名稱	貨號	規(guī)格	貨期	價格
動物Co-IP試劑盒（protein A/G磁珠）	FI8802	20次/40次	現(xiàn)貨	點擊詢價
動物Co-IP試劑盒（protein G樹脂）	FI8803	20次/40次	現(xiàn)貨
植物Co-IP試劑盒（protein A/G磁珠）	FI8812	20次/40次	現(xiàn)貨
植物Co-IP試劑盒（protein G樹脂）	FI8813	20次/40次	現(xiàn)貨

添加微信領(lǐng)取coip試劑盒說明書

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免疫共沉淀試劑盒（Co-IP試劑盒）簡介

輝駿生物的免疫共沉淀試劑盒能夠高效完成抗原的免疫沉淀（IP）及免疫共沉淀（Co-IP）實驗。首先，將特異性的抗體加入樣品中與目標抗原形成免疫復(fù)合物，然后將其結(jié)合在protein G或protein A/G beads上。通過漂洗去除未結(jié)合物質(zhì)后，用低 pH 的洗脫液將免疫復(fù)合物從beads上洗脫下來。洗脫的蛋白產(chǎn)物既可以用Western blot檢測已知蛋白，也可以用質(zhì)譜（LC-MS/MS）鑒定未知蛋白。

免疫共沉淀CoIP試劑盒應(yīng)用

蛋白-蛋白間的相互作用是蛋白質(zhì)發(fā)揮生物學(xué)功能的主要模式。CO-IP試劑盒采用Protein G或Protein A/G beads來捕獲目標蛋白抗體，進而捕獲樣本中天然結(jié)合的目標蛋白及其互作蛋白。以下列舉了可應(yīng)用CO-IP試劑盒的幾個研究方向：

1. 病毒、細菌等病原體侵染宿主細胞的機制；

2. 酶和底物的作用機制；

3. 天然狀態(tài)下蛋白調(diào)控復(fù)合體的研究。

CoIP免疫共沉淀試劑盒組分

試劑名稱	體積（20 Tests）	體積（40 Tests）	保存條件
Protein G beads或Protein A/G beads	850 μL	1.7 mL	4 ℃
裂解緩沖液	11 mL	22 mL	4 ℃
漂洗液	40 mL	80 mL	4 ℃
洗脫緩沖液	1.1 mL	2.2 mL	4 ℃
蛋白酶抑制劑	300 μL	600 μL	-20 ℃

Co-IP免疫共沉淀試劑盒優(yōu)勢

1、特異性強：親和材料經(jīng)過特殊優(yōu)化，與誘餌蛋白結(jié)合力更強，調(diào)取的互作蛋白更多。

2、裂解效率高：不同優(yōu)化的裂解液配方分別適用于動物、植物樣本。

3、洗脫液適配后續(xù)Western Blot及質(zhì)譜（LC-MS/MS）實驗。

4、操作簡便，耗時短，適用于初學(xué)者。

5、應(yīng)用靈活：可用于任何內(nèi)源性目標蛋白的免疫沉淀或免疫共沉淀實驗。

免疫共沉淀Co-IP試劑盒使用流程簡述

1. 將細胞裂解液與所選抗體在室溫下孵育 1-2 小時，或 4 ℃ 過夜。

2. 在室溫下，將抗原/抗體復(fù)合物與protein G或ProteinA/G beads結(jié)合 1-2 小時。

3. 漂洗、洗脫得到目標蛋白及其互作蛋白復(fù)合物。

CoIP試劑盒-客戶文獻

1. Jiang, S. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP. Cancer Research. 2019. IF= 13.312.

2. Huang C.Y. et al: UBAP2L arginine methylation by PRMT1 modulates stress granule assembly. Cell Death Differ. 2020. IF=12.067.

3. Li T. et al: Phosphorylated ATF1 at Thr184 promotes metastasis and regulates MMP2 expression in gastric cancer. J Transl Med. 2022. IF=8.44.

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