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服務(wù)介紹

載體構(gòu)建技術(shù)實(shí)驗(yàn)原理


載體構(gòu)建是分子生物學(xué)研究中最常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù),可用于體外條件下基因(包括mRNA,lncRNA,circRNA,miRNA)的過(guò)表達(dá)、干擾、突變、插入或缺失實(shí)驗(yàn),或用于載體改造等。


在基因工程中,常用人工構(gòu)建的含有多克隆位點(diǎn)和抗性基因的質(zhì)粒作為載體。首先采用PCR等方法體外擴(kuò)增外源的目標(biāo)DNA片段,之后依靠限制性內(nèi)切酶的切割和DNA連接酶的連接,將外源DNA片段構(gòu)建到質(zhì)粒上;質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌或者轉(zhuǎn)染細(xì)胞,可以使外源DNA片段復(fù)制或表達(dá)。





載體構(gòu)建技術(shù)實(shí)驗(yàn)流程


1
引物設(shè)計(jì)與合成


2
PCR擴(kuò)增目的基因


3
制備線性化載體


4
同源重組連接目的基因和載體


5
轉(zhuǎn)化大腸桿菌,篩選陽(yáng)性菌落


6
菌落PCR鑒定、酶切鑒定和測(cè)序






載體構(gòu)建實(shí)驗(yàn)服務(wù)信息


駿生物提供的主要載體類型有:真核表達(dá)載體,原核表達(dá)載體,慢病毒表達(dá)載體,慢病毒干擾載體,circRNA表達(dá)載體,熒光素酶報(bào)告基因載體,植物表達(dá)載體,克隆載體等(請(qǐng)?jiān)斣冧N售或客服人員)


項(xiàng)目名稱

客戶提供

結(jié)果交付

實(shí)驗(yàn)周

價(jià)格
載體構(gòu)建

待構(gòu)建的基因模板(也可委托我方全基因合成)
待構(gòu)建的載體(我方已有的載體可免費(fèi)提供)
實(shí)驗(yàn)信息表(基因序列,載體要求等)
質(zhì)?;蚋视途捎帽4孢\(yùn)輸

1、構(gòu)建好的載體質(zhì)粒約3ug
2、構(gòu)建好的載體甘油菌1ml
3、載體圖譜
4、原始測(cè)序文件和拼接文件
5、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

2-4周



點(diǎn)擊詢價(jià)




添加技術(shù)員微信溝通實(shí)驗(yàn)
18927549347





載體構(gòu)建技術(shù)服務(wù)*輝駿優(yōu)勢(shì)


1

十年服務(wù)經(jīng)驗(yàn),客戶成果發(fā)表在NatureMethods,Oncogene,Cell Research等高水平期刊上。

2

自有分子及細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)平臺(tái),能有效制定并執(zhí)行最優(yōu)的實(shí)驗(yàn)路線。

3

售后技術(shù)支持將一直保持到客戶發(fā)表文章,確??蛻舭残倪M(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)及投稿。







載體構(gòu)建實(shí)驗(yàn)-客戶文章


1637896170298984.png  Sun C. et al: Oncofetal gene SALL4 reactivation by hepatitis B virus counteracts miR-200c in PD-L1-induced T cell exhaustion. Nat Commum. 2018,IF= 14.919.

【研究?jī)?nèi)容】:本研究通過(guò)基因表達(dá)檢測(cè)、原位雜交、雙熒光素酶、ChIP等實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌的SALL4或PD-L1表達(dá)與miR-200C水平和患者生存期呈負(fù)相關(guān),高水平miR-200C直接靶向CD274 (編碼PD-L1)來(lái)降低其表達(dá)。成年期HBV誘導(dǎo)導(dǎo)致STAT3激活,使SALL4蛋白重新表達(dá),從而抑制miR-200c轉(zhuǎn)錄。HBV-pSTAT3-SALL4-miR-200C信號(hào)通路可調(diào)節(jié)PD-L1的表達(dá),針對(duì)該通路的治療策略可能會(huì)逆轉(zhuǎn)病毒誘導(dǎo)的免疫衰竭。

使用技術(shù):shRNA慢病毒載體構(gòu)建技術(shù)服務(wù)、載體構(gòu)建實(shí)驗(yàn)



1637896170298984.png

  Chen R. et al: Lnc-GD2H Promotes Proliferation by Forming a Feedback Loop With c-Myc and Enhances Differentiation Through Interacting With NACA to Upregulate Myog in C2C12 Myoblasts. Front Cell Dev Biol. 2021, IF= 6.684.

【研究?jī)?nèi)容】:本研究通過(guò)雙熒光素酶,ChIP,DNA pull down和RNA pull down,RIP等實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)lnc-GD2H在肌肉再生中的作用:在成肌細(xì)胞增殖過(guò)程中,c-Myc蛋白與lnc-GD2H啟動(dòng)子結(jié)合并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)錄,促進(jìn)成肌細(xì)胞增殖;在成肌細(xì)胞分化過(guò)程中,lnc-GD2H與成肌細(xì)胞分化相關(guān)蛋白NACA相互作用,抑制其在Myog啟動(dòng)子的富集,減輕NACA對(duì)Myog的抑制作用,促進(jìn)Myog表達(dá)和成肌細(xì)胞分化。

使用技術(shù):雙熒光素酶載體構(gòu)建、ChIP、DNA pull down、RNA pull down,RIP


1637896170298984.png

  Fu X.Q. et al: Activation of STAT3 is a key event in TLR4 signaling-mediated melanoma progression. Cell Death Dis. 2020, IF= 8.469.

【研究?jī)?nèi)容】:本研究通過(guò)基因表達(dá)/敲除、細(xì)胞功能檢測(cè),動(dòng)物實(shí)驗(yàn),雙熒光素酶分析等實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)人黑色素瘤中TLR4的表達(dá)與STAT3的激活/磷酸化呈正相關(guān),TLR4配體通MYD88和TRIF激活黑色素瘤細(xì)胞中的STAT3,促進(jìn)了腫瘤的生長(zhǎng)。當(dāng)抑制黑色素瘤中STAT3的功能時(shí),TLR4激活產(chǎn)生的效應(yīng)減弱,說(shuō)明STAT3激活對(duì)TLR4信號(hào)介導(dǎo)的黑色素瘤發(fā)展至關(guān)重要,為黑色素瘤的病理生理學(xué)提供了新的線索。

使用技術(shù):基因調(diào)取檢測(cè)服務(wù)、真核表達(dá)載體構(gòu)建實(shí)驗(yàn)


1637896170298984.png  Cai X.D. et al: LncRNA ILF3-AS1 mediated the occurrence of epilepsy through suppressing hippocampal miR-212 expression. Aging-US. 2020, IF=5.682.

【研究?jī)?nèi)容】:本研究通過(guò)基因過(guò)表達(dá)、雙熒光素酶等實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)LncRNA ILF3-AS1在顳葉癲癇(TLE)患者的海馬和血清中水平升高,ILF3-AS1通過(guò)靶向miR-212誘導(dǎo)炎性細(xì)胞因子和MMP3、MMP9的表達(dá)。值得注意的是,針對(duì)ILF3-AS1/miR212/MMP3/9軸的治療策略可能是治療TLE的有效方法。

使用技術(shù):真核表達(dá)載體構(gòu)建檢測(cè)實(shí)驗(yàn)、基因調(diào)取外包服務(wù)



1637896170298984.png

  Ma H.H. et al: Pharmacological Properties of the Type 1 Tyramine Receptor in the Diamondback Moth, Plutella xylostella. INT J MOL SCI. 2019, IF=5.923.

【研究?jī)?nèi)容】:酪胺受體(TAR)可被酪胺(TA)或章魚(yú)胺(OA)激活,并已被證明與多種昆蟲(chóng)的生理調(diào)節(jié)(如味覺(jué)反應(yīng)、社會(huì)組織和學(xué)習(xí)行為)有關(guān)。作者在小菜蛾中新克隆得到一個(gè)酪胺受體基因Pxtar1,并在293T細(xì)胞中利用慢病毒進(jìn)行了該基因的穩(wěn)定表達(dá),功能實(shí)驗(yàn)也顯示酪胺可以激活PxTAR1受體,此外,作者還調(diào)查了Pxtar1在小菜蛾體內(nèi)的表達(dá)模式。

使用技術(shù):過(guò)表達(dá)慢病毒載體構(gòu)建、慢病毒包裝





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