雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?* 技術(shù)原理

熒光素底物在熒光素酶作用下會發(fā)光，且光強度能反應熒光素酶的蛋白表達量。而熒光素酶的蛋白表達量，又和啟動子活性、mRNA的穩(wěn)定性及翻譯效率等有關。利用這個特點，將待測啟動子、UTR等序列與熒光素酶ORF框融合表達，再檢測其發(fā)光強度，就能判斷這些序列對蛋白表達的影響。這就叫熒光素酶報告基因檢測。為了減少實驗誤差，一般會同時轉(zhuǎn)染一個能穩(wěn)定表達熒光素酶的質(zhì)粒作為內(nèi)參，所以叫雙熒光素酶報告基因檢測。

雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?* 技術(shù)流程

圖一：啟動子活性分析示意圖

圖二：啟動子和轉(zhuǎn)錄因子互作分析示意圖

雙熒光素酶報告基因實驗 * 應用背景

雙熒光素酶報告基因分析通常以螢火蟲熒光素酶為報告基因，以海腎熒光素酶為內(nèi)參基因。所構(gòu)成的報告系統(tǒng)具有靈敏度高、動態(tài)范圍廣、應用靈活等優(yōu)勢，廣泛應用于基因調(diào)控、非編碼RNA靶向互作等研究領域。

輝駿生物根據(jù)以下兩種應用制定不同的實驗方案，可針對客戶情況提出合適的建議>>

1. 檢測啟動子活性；

2. 檢測轉(zhuǎn)錄因子與目標啟動子的相互作用。

?聯(lián)系技術(shù)支持?

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雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?* 服務信息

服務項目	服務內(nèi)容	結(jié)果交付	實驗周期	客戶提供	價格
啟動子活性分析	合成和構(gòu)建2kb啟動子熒光素酶載體	載體質(zhì)粒、甘油菌 測序結(jié)果和實驗報告	5-6周	待測細胞及其培養(yǎng)方法 實驗信息表	點擊詢價
	構(gòu)建不同截短啟動子的熒光素酶載體	載體質(zhì)粒、甘油菌 測序結(jié)果和實驗報告
	細胞培養(yǎng)和雙熒光素酶檢測	檢測數(shù)據(jù)和實驗報告
啟動子與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合驗證	構(gòu)建野生型和突變型啟動子的熒光素酶載體	載體質(zhì)粒、甘油菌 測序結(jié)果和實驗報告	5-6周	待測細胞及其培養(yǎng)方法 轉(zhuǎn)錄因子基因質(zhì)粒模板及其原始測序文件 實驗信息表	點擊詢價
	構(gòu)建轉(zhuǎn)錄因子表達載體	載體質(zhì)粒、甘油菌 測序結(jié)果和實驗報告
	細胞培養(yǎng)和雙熒光素酶檢測	檢測數(shù)據(jù)和實驗報告

雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?*?送樣要求

樣本類型	建議送樣量
目的基因模板	質(zhì)粒約2ug，或甘油菌約100ul
待測細胞	（廣州市內(nèi)客戶）可接受活細胞，2個T25瓶，細胞匯合度＞80%； （其他地區(qū)客戶）凍存細胞2管。

?聯(lián)系技術(shù)支持?

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雙熒光素酶檢測啟動子活性研究案例—客戶文章解析

Tang W.W. et al: The p300/YY1/miR-500a-5p/HDAC2 signalling axis regulates cell proliferation in human colorectal cancer.?

Nature Communications. 2019, IF=12.121.

P300/YY1/miR-500A-5p/HDAC2信號軸調(diào)節(jié)結(jié)直腸癌癌細胞增殖

研究概述

結(jié)直腸癌(CRC)是全球癌癥相關性死亡的主要原因之一，復發(fā)率和轉(zhuǎn)移率較高。闡明CRC發(fā)生和轉(zhuǎn)移的機制將有助于尋找新的診斷生物標志物和開發(fā)有效的治療干預措施。本研究發(fā)現(xiàn)miR-500a-5p在結(jié)直腸癌組織中下調(diào)，miR-500a-5p水平受到Y(jié)Y1/p300/HDAC2轉(zhuǎn)錄復合體的協(xié)同調(diào)控。此外，miR-500a-5p還通過直接結(jié)合HDAC2的3’UTR來抑制結(jié)直腸癌細胞增殖和遷移。

研究路線

蛋白組/代謝組實驗

? iTRAQ 定量蛋白質(zhì)組學

? Label Free 實驗檢測服務

? LC-MS/MS 蛋白質(zhì)譜鑒定

? DIA 全息掃描定量蛋白質(zhì)
??廣泛靶向代謝組學

蛋白/核酸相互作用實驗

? GST pull down

? RNA pull down

? DNA pull down

? Co-IP 免疫共沉淀

? TAP-MS串聯(lián)親和純化

分子細胞生物學實驗

? 基因調(diào)取/合成 (cDNA克隆)

?熒光定量PCR (qPCR)

? 載體構(gòu)建實驗服務

?miRNA靶基因驗證
??慢病毒包裝

科研產(chǎn)品

??哺乳動物細胞表達載體

? 人cDNA克隆庫

? 慢病毒表達載體

? 慢病毒干擾載體

抗體工程服務

??單克隆抗體測序

? 抗體從頭測序

? 抗體表達服務

? 重組抗體表達

實驗試劑盒

? RNA pull down 試劑盒

? GST pull down 試劑盒

? COIP 試劑盒

? Flag 試劑盒

輝駿實力

4899+客戶已添加微信獲取實驗優(yōu)惠！

輝駿生物提供的雙熒光素酶報告檢測啟動子活性服務主要分為以下兩種：

1. 啟動子活性分析，用于檢測待測啟動子是否有活性及其活性區(qū)域；

2. 啟動子與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合驗證，用于研究某轉(zhuǎn)錄因子是否調(diào)控某基因的待測啟動子，以及它們的結(jié)合區(qū)域。

添加技術(shù)員微信溝通實驗

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雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?/strong>*輝駿生物優(yōu)勢

Luc（雙熒光素酶報告基因）技術(shù)服務樣本要求

1. 送樣要求

2. 樣本保存和運輸要求：

（1）質(zhì)?；蚋视途捎帽４孢\輸；

（2）活細胞常溫取樣；

（3）凍存細胞干冰取樣/運輸：需要至少在送樣前一天通知我方。

?

雙熒光素酶檢測啟動子活性結(jié)果示例

雙熒光素酶報告基因檢測圖

雙熒光素酶檢測啟動子活性客戶文章

1. Chen R. et al: Lnc-GD2H Promotes Proliferation by Forming a Feedback Loop With c-Myc and Enhances Differentiation Through Interacting With NACA to Upregulate Myog in C2C12 Myoblasts. Front Cell Dev Biol. 2021, IF=6.684. 【研究內(nèi)容】：本研究采用熒光素酶報告分析、pull?down、ChIP、RIP等方法，研究了新型非編碼RNA(LncRNA)lnc-GD2H在促進C2C12成肌細胞增殖分化和肌肉再生中的作用。結(jié)果表明，在成肌細胞增殖和分化過程中，lnc-GD2H的表達增強，且在成肌細胞增殖過程中，lnc-GD2H促進了增殖標記基因的表達，并與c-Myc形成反饋環(huán)。在成肌細胞分化過程中，lnc-GD2H與NACA相互作用，減輕NACA對Myog的抑制作用，從而促進Myog的表達，促進分化。這些結(jié)果有助于理解lncRNAs調(diào)控成肌細胞增殖和分化的機制。 使用相關技術(shù): 啟動子與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合驗證，轉(zhuǎn)錄因子驗證，雙熒光素酶如何檢測

2. Zhu J.Y. et al: Aryl Hydrocarbon Receptor Promotes IL-10 Expression in Inflammatory Macrophages Through Src-STAT3 Signaling Pathway. Frontiers in Immunology. 2018 , IF=4.716. 【研究內(nèi)容】：本研究首次大規(guī)模鑒定了家蠶絲腺中與絲素基因啟動子區(qū)域相互作用的蛋白質(zhì)，包括絲素重鏈(Fibre?H)、絲素輕鏈(FiBL)和一個25kD的多肽蛋白(P25)。通過DNA?pull?down結(jié)合質(zhì)譜分析，從后絲腺中分別鑒定出198、292和247個或330、305和460個與FibH、FiBL和P25啟動子區(qū)域相互作用的蛋白質(zhì)。此外，在M4和L5D5中分別鑒定出135個和212個蛋白是FibH、FiBL和P25的共同互作蛋白。其中鑒定出31個潛在的轉(zhuǎn)錄因子，如Y-box和PolyA結(jié)合蛋白，它們在核苷酸結(jié)合、ATP結(jié)合或蛋白質(zhì)折疊中發(fā)揮作用。 使用相關技術(shù): Luc技術(shù)服務，啟動子活性分析檢測

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