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CircRNA pull-down試劑盒簡(jiǎn)介

輝駿生物自主研發(fā)的 circRNA pull-down 試劑盒（已獲得國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局發(fā)明專利授權(quán)），利用“F2標(biāo)簽”與其特異性配體的強(qiáng)親和力，高效調(diào)取細(xì)胞中的目標(biāo)cirRNA及其結(jié)合蛋白。F2標(biāo)簽是一段短的RNA序列，與目標(biāo)circRNA連接后，幾乎不影響其結(jié)構(gòu)和功能。

實(shí)驗(yàn)前先將F2標(biāo)簽序列與目標(biāo)circRNA序列連接，構(gòu)建成F2-circRNA過表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染并裂解目的細(xì)胞，之后采用特異性配體磁珠來調(diào)取F2-circRNA及其結(jié)合蛋白。去除未結(jié)合的蛋白后，可以采用多種方法洗脫蛋白質(zhì)。分離的蛋白產(chǎn)物既可以用Western blot檢測(cè)已知蛋白，也可以用質(zhì)譜（LC-MS/MS）鑒定未知蛋白。

CircRNA Pull down試劑盒應(yīng)用

蛋白-蛋白間的相互作用是蛋白質(zhì)發(fā)揮生物學(xué)功能的主要模式，蛋白質(zhì)會(huì)通過結(jié)合不同的伙伴來行駛不同的功能，形成復(fù)雜的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)。以下列舉了可應(yīng)用pull down試劑盒的幾個(gè)研究方向或研究領(lǐng)域：

1. 確定2個(gè)蛋白是否具有直接相互作用；

2. 確定蛋白之間結(jié)合的結(jié)構(gòu)域；

3. 病毒、細(xì)菌等病原體侵染宿主細(xì)胞的機(jī)制；

4. 酶和底物的作用機(jī)制；

5. 蛋白調(diào)控復(fù)合體的研究。

CircRNA pull-down試劑盒組分

CircRNA Pull down試劑盒優(yōu)勢(shì)

1、調(diào)取效率高：F2標(biāo)簽序列與F2配體磁珠具有很強(qiáng)親和力，能夠高效調(diào)取F2-circRNA及其結(jié)合蛋白；

2、不受circRNA接口處序列限制，適用于各種序列的circRNA；

3、F2標(biāo)簽很短，只有16nt，幾乎不影響目標(biāo)RNA的結(jié)構(gòu)或功能；

4、洗脫液適配后續(xù)Western Blot及質(zhì)譜（LC-MS/MS）實(shí)驗(yàn)。

5、操作簡(jiǎn)便，耗時(shí)短，適用于初學(xué)者。

CircRNA-pulldown試劑盒使用流程簡(jiǎn)述

1. 構(gòu)建F2-circRNA表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染目標(biāo)細(xì)胞并進(jìn)行表達(dá)檢測(cè)；

2. 裂解樣本，同時(shí)制備F2配體磁珠；

3. 將細(xì)胞裂解液加入F2配體磁珠中，4 ℃孵育2~4 h；

4. 漂洗、洗脫得到目標(biāo)蛋白及其互作蛋白復(fù)合物。

CircRNA pulldown試劑盒使用案例

circrna pulldown WB結(jié)果圖（陽性）

circrna pull-down MS：質(zhì)譜檢索表格（部分展示）

circrna pull down試劑盒—客戶文章

1. A positive feedback between PDIA3P1 and OCT4 promotes the cancer stem cell properties of esophageal squamous cell carcinoma. Cell Communication and Signaling. 2024. IF=8.4.

2. Fumarate induces LncRNA-MIR44352HG to regulate glutamine metabolism remodeling and promote the development of FHdeficient renal cell carcinoma. Cell Death and Disease. 2024. IF=9.2.

circRNA pull down試劑盒（動(dòng)物）說明書

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