產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 貨期 | 價(jià)格 |
GST pull-down試劑盒 | FI8804 | 20次/40次 | 現(xiàn)貨 | |
His pull-down試劑盒 | FI8805 | 20次/40次 | 現(xiàn)貨 |
輝駿生物的GST pull-down試劑盒和His pull down試劑盒能夠高效調(diào)取GST融合蛋白或His融合蛋白在各類樣本中的互作蛋白。
在GST
pull-down或His pull down實(shí)驗(yàn)前,先通過(guò)基因工程技術(shù)手段將目標(biāo)基因連入帶有GST標(biāo)簽或His標(biāo)簽的原核表達(dá)載體中,并導(dǎo)入大腸桿菌中進(jìn)行原核表達(dá)。之后,GST融合蛋白通過(guò)GTH(
Glutathione)樹(shù)脂純化,His融合蛋白通過(guò)Ni-NTA 樹(shù)脂純化。最后,加入樣本裂解液孵育,樣本中與GST或His融合蛋白有相互作用的蛋白便可被吸附而分離。分離的蛋白產(chǎn)物既可以用Western blot檢測(cè)已知蛋白,也可以用質(zhì)譜(LC-MS/MS)鑒定未知蛋白。
蛋白-蛋白間的相互作用是蛋白質(zhì)發(fā)揮生物學(xué)功能的主要模式,蛋白質(zhì)會(huì)通過(guò)結(jié)合不同的伙伴來(lái)行駛不同的功能,形成復(fù)雜的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)。以下列舉了可應(yīng)用蛋白 pull down試劑盒的幾個(gè)研究方向或研究領(lǐng)域:
1. 確定2個(gè)蛋白是否具有直接相互作用;
2. 確定蛋白之間結(jié)合的結(jié)構(gòu)域;
3. 病毒、細(xì)菌等病原體侵染宿主細(xì)胞的機(jī)制;
4. 酶和底物的作用機(jī)制;
5. 蛋白調(diào)控復(fù)合體的研究。
試劑名稱 | 體積(20 Tests) | 體積(40 Tests) | 保存條件 |
GST標(biāo)簽純化樹(shù)脂/His標(biāo)簽純化樹(shù)脂 | 950 μL | 1.9 mL | 4 ℃ |
裂解緩沖液 | 24 mL | 48 mL | 4 ℃ |
漂洗液 | 70 mL | 140 mL | 4 ℃ |
洗脫緩沖液 | 1.1 mL | 2.2 mL | 4 ℃ |
蛋白酶抑制劑 | 600 μL | 1.2 mL | -20 ℃ |
1、調(diào)取效率高:融合蛋白與樹(shù)脂親和力強(qiáng),可以高效純化目標(biāo)蛋白及其互作蛋白;
2、適用范圍廣:優(yōu)化的裂解液配方適用于動(dòng)物、植物組織、微生物等各類型組織和細(xì)胞樣本;
3、洗脫液適配后續(xù)Western Blot及質(zhì)譜(LC-MS/MS)實(shí)驗(yàn)。
4、操作簡(jiǎn)便,耗時(shí)短,適用于初學(xué)者。
1. 通過(guò)原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)帶有GST標(biāo)簽或His標(biāo)簽的融合蛋白;
2. 在細(xì)菌上清液中加入GST標(biāo)簽親和純化樹(shù)脂或His標(biāo)簽親和純化樹(shù)脂,4 ℃孵育2 小時(shí);
3. 將待測(cè)樣本裂解液加入上述體系中,4 ℃孵育過(guò)夜;
4. 漂洗、洗脫得到目標(biāo)蛋白及其互作蛋白復(fù)合物。
GST pull down WB結(jié)果圖(陽(yáng)性)
His pull down WB結(jié)果圖(陽(yáng)性)
GST Pull-down MS:Western blot檢測(cè)圖
蛋白pull-down MS:質(zhì)譜檢索表格(部分展示)
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