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在眾多科研實(shí)驗(yàn)中，養(yǎng)細(xì)胞是所有實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)，腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)過程中，總會遇到各種問題。輝駿生物列舉以下幾種情況，并提供了一些解決方法供大家參考。

狀態(tài) 1： 細(xì)胞培養(yǎng)液變渾濁了，經(jīng)常見到是米湯樣，黃色液體，一般認(rèn)為細(xì)菌污染。

狀態(tài) 2：細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)含有能動的小黑點(diǎn)，一般認(rèn)為是黑膠蟲。

狀態(tài) 3：胞培養(yǎng)基清亮，但是能看到飄在培養(yǎng)液帶有毛毛的白色的菌狀物質(zhì)，有可能就是真菌感染。

方法：若細(xì)胞污染可以考慮直接扔棄，此外，還需要將培養(yǎng)箱用酒精棉球擦干凈，并用紫外照射半小時，防止再次污染。同時建議細(xì)胞培養(yǎng)時，在培養(yǎng)基中加入青鏈霉素 (尤其是初學(xué)者)

方法 1：用胰酶消化下來后，低速短時間離心，不同實(shí)驗(yàn)室不一樣，如果平時是 1000 轉(zhuǎn) 5 min 的話，就可以改為 700 轉(zhuǎn) 3 min，用新的培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞收集是少一點(diǎn)，但是一般都能干凈很多。多傳幾代就好多了。

方法 2：如果多次嘗試之后還是不干凈，就懷疑是否存在支原體污染，用抗支原體藥就可以。一般用上 3～5 天，細(xì)胞就恢復(fù)干凈。

用 PBS 洗兩遍之后，加胰酶進(jìn)去，晃一晃，迅速將胰酶倒出，再用 PBS 洗一下，再加胰酶正常消化。死細(xì)胞由于粘附能力很弱，第一次加胰酶進(jìn)去以后會掉下來，第二次加胰酶下來的細(xì)胞才是活性比較強(qiáng)的細(xì)胞。整完一次之后，再次傳代方法同上，一般 2～3 次之后，細(xì)胞就完好如初了。

方法 1：一般情況下，從血清下手就行，要么換好血清，要么提高血清濃度，血清濃度提高到 15%～20% 培養(yǎng) 48 h，換成正常 10% 的濃度，用高濃度的血清培養(yǎng)時間過長對細(xì)胞有毒性。

方法 2：血清下手之后可以同時采取提高細(xì)胞密度的方法，從培養(yǎng)瓶換到六孔板，12 孔板等，細(xì)胞密度大，細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子多，腫瘤細(xì)胞通過旁分泌途徑促進(jìn)細(xì)胞生長。

預(yù)防策略：細(xì)胞胞質(zhì)疏松，老化的原因在于細(xì)胞傳代次數(shù)比較多，胰酶消化時間太長，這時一定要控制細(xì)胞傳代次數(shù)，注意胰酶消化時間，胰酶消化時間過長，容易導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)不佳以及胞質(zhì)疏松?；蛘呖蓢L試將細(xì)胞凍起來，過段時間復(fù)蘇，細(xì)胞會長得比較好。

很多人都會遇到從其他地方買來細(xì)胞或者快遞運(yùn)來細(xì)胞，裝滿培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶的細(xì)胞怎么處理的問題。

1：先放 37℃ 培養(yǎng)箱放置 4 小時，這樣細(xì)胞在通過長途跋涉以后得以穩(wěn)定，觀察細(xì)胞狀態(tài)。

2：將新鮮培養(yǎng)基和舊的培養(yǎng)基 1:1 稀釋，如果細(xì)胞狀態(tài)不好，可以將血清濃度提到 15%，否則正常培養(yǎng)，這樣有一個過渡期，不至于細(xì)胞換血清之后狀態(tài)不佳，15% 的血清培養(yǎng) 48 h 之后換成正常濃度培養(yǎng)。