RNA 不僅是基因和蛋白的橋梁(mRNA),而且是細(xì)胞器的組成成分(18s rRNA 等)及基因表達(dá)調(diào)控的重要因子(miRNA、lncRNA、circRNA),以 RNA 為中心的分子互作研究也是生物有機(jī)體生命活動(dòng)(如器官發(fā)育分化、疾病發(fā)生等)規(guī)律闡釋的重點(diǎn)內(nèi)容。輝駿生物提供的以 RNA 為中心的分子互作研究技術(shù),包括篩選型的 ChIRP-MS/ChIRP-Seq 和 RNA pull-down_MS,及驗(yàn)證型的 ChIRP-WB/ ChIRP-QPCR 和 RNA pull-down_WB 等。
1 .ChIRP-MS/ChIRP-Seq
簡(jiǎn)介:在特定時(shí)間點(diǎn)用甲醛交聯(lián)等方式固定細(xì)胞內(nèi) RNA 與蛋白及核酸的互作復(fù)合物,再利用生物素標(biāo)記的探針及鏈霉親和素磁珠純化出與 RNA 互作的蛋白及核酸的復(fù)合物,分離產(chǎn)物中的蛋白和核酸分別做質(zhì)譜鑒定和高通量測(cè)序,即可篩選出與 RNA 互作的蛋白和核酸。
應(yīng)用:篩選與目的 RNA 互作的蛋白、DNA 或 RNA
優(yōu)勢(shì):
1.高效、通量大,一次性篩選出可能與目的 RNA 互作的蛋白或核酸;
2.反義探針直接調(diào)取內(nèi)源目的 RNA 及其復(fù)合物,所得結(jié)果更接近生理情況。
2. RNA pull-down_MS
簡(jiǎn)介:體外轉(zhuǎn)錄目的 RNA 的一部分或全長(zhǎng),用生物素標(biāo)記轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,再與鏈霉親和素磁珠孵育使之固定在磁珠上,用以“pull down”互作蛋白,純化的產(chǎn)物蛋白經(jīng)質(zhì)譜鑒定,即可篩選到與目的 RNA 可能互作的蛋白。
應(yīng)用:篩選與目的RNA互作的蛋白。
優(yōu)勢(shì):
1.體外直接轉(zhuǎn)錄目的 RNA 作為誘餌,避免了 RNA 互補(bǔ)探針導(dǎo)致的非特異性結(jié)果;
2.高效、通量大,一次性獲得可能與目的 RNA 互作的蛋白。
3. ChIRP-WB/ChIRP-QPCR
ChIRP-WB 用于 ChIRP-MS 篩選到的 RNA 互作蛋白驗(yàn)證,而 ChIRP-QPCR 用于 ChIRP-Seq篩選到的 RNA 互作核酸驗(yàn)證。
4. RNA pull-down_WB
RNA pull down-WB 用于 RNA pull down-MS 篩選到的 RNA 互作蛋白驗(yàn)證。
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