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中文標(biāo)題：癌癥易感性候選物9的沉默抑制胃癌并逆轉(zhuǎn)化學(xué)抗性

發(fā)表期刊：Oncotarget

影響因子：5.168

發(fā)表時(shí)間：2017年1月

合作單位：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院神經(jīng)生物學(xué)教研室

運(yùn)用技術(shù)：載體構(gòu)建（由輝駿生物提供技術(shù)支持）

● 研究背景

胃癌(GC)作為最常見(jiàn)的實(shí)體惡性腫瘤之一，由于其局部晚期轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)頻率較高，預(yù)后較差?；熌退幙赡苁腔熀髲?fù)發(fā)的原因之一，因此了解化療耐藥的潛在機(jī)制，尋找新的治療靶點(diǎn)，進(jìn)一步改善胃癌的預(yù)后是至關(guān)重要的。長(zhǎng)非編碼RNA(LncRNA)是一種不能翻譯成蛋白質(zhì)的內(nèi)源性RNA，它可以作為許多基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，參與癌癥增殖、侵襲和化療耐藥的關(guān)鍵步驟。癌易感候選物9(CASC9)基因位于8q21.11，編碼一個(gè)lncRNA。該基因在食管鱗狀細(xì)胞癌(ESCC)中被證實(shí)可調(diào)節(jié)癌細(xì)胞的遷移和侵襲。通過(guò)基因芯片檢測(cè)，研究者發(fā)現(xiàn)CASC9在胃癌組織中的表達(dá)是正常胃組織的近8倍，這一觀察結(jié)果促使研究者進(jìn)一步研究其在細(xì)胞增殖、侵襲和化療耐藥中的作用。

● 研究結(jié)果

1.     CASC9在胃癌組織和細(xì)胞系中表達(dá)上調(diào)

首先，研究者對(duì)5例胃癌(GC)和配對(duì)正常胃組織(NST)中的CASC9的表達(dá)進(jìn)行了微陣列分析。結(jié)果顯示，GC組中CASC9的表達(dá)幾乎是NST組中的8倍(圖1A)。QRT-PCR進(jìn)一步證實(shí)了這一結(jié)果，與對(duì)照組NST相比，CASC9在89例胃癌組織中的表達(dá)顯著增高(圖1B)。CASC9在胃癌細(xì)胞系BGC823和SGC7901細(xì)胞中的表達(dá)明顯高于正常胃上皮細(xì)胞(圖1B)。研究者還進(jìn)一步分析了CASC9表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果顯示，CASC9的表達(dá)水平與腫瘤大小、浸潤(rùn)深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)有關(guān)，在Borrmann3型、4型、低分化、干擾素γ浸潤(rùn)型的腫瘤中，CASC9的表達(dá)水平明顯高于Borrman1型、2型、高、中分化、干擾素α/β浸潤(rùn)型的腫瘤，表明CASC9可能在胃癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中起一定作用。

圖1

2. CASC9在胃癌耐藥細(xì)胞系中表達(dá)上調(diào)

紫杉醇對(duì)BGC823/DR和SGC7901/DR細(xì)胞的IC50值分別為183.33±0.4 1μg/L和146.54±0.5 7μg/L，明顯高于BGC82 3和SGC790 1細(xì)胞。阿霉素對(duì)BGC823/DR和SGC7901/DR細(xì)胞的IC50值分別為7.2 6±0.2 1μg/mL和5.41±0.14μg/mL，明顯高于BGC823和SGC7901細(xì)胞。CASC9在耐藥的BGC823/DR和SGC7901/DR細(xì)胞中的表達(dá)明顯增高(圖1B)，這表明CASC9的過(guò)度表達(dá)與胃癌的化療耐藥有關(guān)。

3. CASC9基因敲除抑制耐藥胃癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和侵襲

為了評(píng)估CASC9是否會(huì)影響耐藥GC細(xì)胞的生長(zhǎng)和侵襲，研究者建立了穩(wěn)定表達(dá)CASC9沉默載體的細(xì)胞，并通過(guò)qRT-PCR確認(rèn)敲低情況（圖2A）。如圖2B和2C所示，CASC9敲低抑制BGC823/DR和SGC7901/DR細(xì)胞的細(xì)胞生長(zhǎng)。流式細(xì)胞分析結(jié)果顯示，CASC9敲低與細(xì)胞凋亡顯著增加相關(guān)（圖2D）。細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，CASC9敲低也阻礙了BGC823/DR和SGC7901/DR細(xì)胞中的細(xì)胞侵襲（圖2E，F(xiàn)）。

圖2

4. CASC9基因敲除抑制耐藥GC細(xì)胞的化療耐藥性

在BGC82 3/DR和SGC790 1/DR細(xì)胞中，CASC9基因敲除使其對(duì)紫杉醇恢復(fù)敏感：IC50值分別從183.33±0.41μg/L和146.54±0.57μg/L降至72.31±0.28μg/L和58.62±0.32μg/L（圖3A）。類似地，CASC9基因敲除也使細(xì)胞恢復(fù)對(duì)阿霉素的敏感性，IC50分別從7.26±0.21μg/mL和5.41±0.14μg/mL降至4.17±0.19μg/mL和2.28±0.16μg/mL（圖3B）。

圖3

5. CASC9基因敲除與耐藥GC細(xì)胞MDR1下調(diào)相關(guān)

微陣列分析的初步結(jié)果顯示，CASC9和MDR1之間存在正相關(guān)。研究者使用Western blot方法檢測(cè)了CASC9基因敲除前后BGC823/DR和SGC7901/DR細(xì)胞中MDR1的表達(dá)水平。結(jié)果表明，CASC9基因敲除與MDR1表達(dá)降低有關(guān)(圖3C)。