蛋白質(zhì)測(cè)序是一種通常利用 質(zhì)譜 (MS) 來確定蛋白質(zhì)氨基酸代碼的方法。 在質(zhì)譜法發(fā)展之前, Edman 降解 是一種涉及逐步降解肽以推導(dǎo)氨基酸順序的方法,是主流方法。 如今,質(zhì)譜法因其易用性和高通量能力而受到青睞,盡管 Edman 降解仍用于該技術(shù)非常適合的特定應(yīng)用。
蛋白質(zhì)測(cè)序經(jīng)常與 DNA
測(cè)序進(jìn)行比較,因?yàn)閮烧叨加糜谏镨b定。 然而,出于幾個(gè)原因,研究人員可能會(huì)選擇蛋白質(zhì)測(cè)序而不是 DNA 測(cè)序。 首先,與 DNA
測(cè)序相比,蛋白質(zhì)測(cè)序產(chǎn)生的針對(duì)序列庫的隨機(jī)匹配要少得多。 這是因?yàn)?DNA 依賴于四個(gè)堿基(A、T、C、G)。 因此,偶然預(yù)計(jì)兩個(gè)不相關(guān)的
DNA 序列具有 25% 的相似性。 相比之下,蛋白質(zhì)序列可以由 20 種不同的氨基酸生成,因此具有更高的靈敏度。 此外,盡管 DNA
數(shù)據(jù)庫目前的規(guī)模要大得多,但與蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫相比,它們受到更多冗余序列的困擾。 這意味著研究人員可以預(yù)期會(huì)遇到更少的蛋白質(zhì)測(cè)序隨機(jī)命中 。
其次,雖然 DNA 測(cè)序?yàn)榱私饪赡墚a(chǎn)生的潛在細(xì)胞蛋白提供了一個(gè)窗口,但蛋白質(zhì)測(cè)序還可以提供有關(guān)翻譯后修飾 (PTM) 的信息,這些信息有助于蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能 。 因此,蛋白質(zhì)測(cè)序在識(shí)別分子途徑中存在的實(shí)際效應(yīng)物方面特別有用。
目的從頭是在不依賴先前建立的數(shù)據(jù)庫的情況下,在給定 MS 光譜的情況下重建肽/蛋白質(zhì)的氨基酸序列。 這種強(qiáng)大的方法是表征蛋白質(zhì)的關(guān)鍵,特別是新的蛋白質(zhì)序列。
從頭蛋白質(zhì)測(cè)序在抗體測(cè)序方面引起了很多關(guān)注。
抗體是我們免疫系統(tǒng)中必不可少的分子,是診斷和治療領(lǐng)域的寶貴工具。 在標(biāo)準(zhǔn)商業(yè)條件下,一旦給動(dòng)物接種了所需的抗原,就開始產(chǎn)生抗體。
這驅(qū)動(dòng)了一種免疫反應(yīng),包括漿細(xì)胞的基因超突變和產(chǎn)生多克隆抗體的重排事件。 使用雜交瘤生成和單 B
細(xì)胞測(cè)序等分子技術(shù),研究人員可以從混合物中分離出單個(gè)克隆(單克隆抗體)。
至關(guān)重要的是,用相同的抗原對(duì)原始動(dòng)物進(jìn)行免疫將產(chǎn)生不同批次的單克隆抗體——每一種都具有獨(dú)特的特定活性。 在這種情況下,DNA 測(cè)序可用于識(shí)別匹配的抗體; 然而,由于它涉及廣泛的生物信息學(xué)分析和詳細(xì)的工作流程,研究人員通常會(huì)選擇另一種方法。
從頭 使用質(zhì)譜進(jìn)行 當(dāng)與互補(bǔ)的生物物理和生化方法結(jié)合使用時(shí),該方法還可以闡明抗體的結(jié)構(gòu)、親和力和 PTM。 此外, 從頭蛋白質(zhì)測(cè)序的一個(gè)重要特征是它避免了從基于同源性的數(shù)據(jù)庫 。 因此,它是抗體驗(yàn)證過程的關(guān)鍵工具。
從實(shí)際的角度來看, 從頭蛋白質(zhì)測(cè)序特別有用,因?yàn)樗梢栽诋a(chǎn)生抗體的細(xì)胞系結(jié)束、DNA 不可用或生產(chǎn)動(dòng)物死亡時(shí)使用。 因此,基于 MS 的 從頭 蛋白質(zhì)測(cè)序 是商業(yè)和非商業(yè)抗體研究和開發(fā)的絕佳工具。
作為抗體蛋白測(cè)序領(lǐng)域的優(yōu)質(zhì)服務(wù)商,輝駿生物引進(jìn)了先進(jìn)的蛋白從頭測(cè)序軟件和質(zhì)譜技術(shù),提供單克隆抗體測(cè)序、多克隆抗體測(cè)序服務(wù),以及抗體表達(dá)服務(wù)。 我們可確保 100% 覆蓋從 N 端到 C 端的抗體蛋白序列,只需 0.1 mg 的抗體蛋白即可生成準(zhǔn)確的重鏈和輕鏈抗體序列的詳細(xì)報(bào)告,保證交付抗體活性,不成功不收費(fèi)。 這讓您對(duì)準(zhǔn)確的抗體蛋白質(zhì)氨基酸序列充滿信心,并確保如果您重組表達(dá)抗體序列,抗體的行為方式與原始抗體相同。
保證100%測(cè)序準(zhǔn)確度,對(duì)輕鏈的測(cè)序誤差范圍在+/-1.2Da,對(duì)重鏈的誤差范圍在+/-1.8Da | 保證VJC、DVJC區(qū)域100%覆蓋 | 保證交付抗體活性 | 僅需100μg純化抗體 | 不成功不收費(fèi) |
客戶提供 | 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 | 交付 | 周期 |
抗體基因序列 /抗體樣品 | 抗體測(cè)序(可選) | 1. 抗體 2. 測(cè)序報(bào)告 3. 質(zhì)檢報(bào)告 4. 實(shí)驗(yàn)報(bào)告 | 2周 |
基因合成&載體構(gòu)建 | 1-2周 | ||
質(zhì)粒抽提 | 3-4周 | ||
細(xì)胞轉(zhuǎn)染&表達(dá)抗體 | |||
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質(zhì)檢:SDS-PAGE、HPLC&ELISA...... |
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