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載體構(gòu)建好后瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞進(jìn)行RT-PCR檢測以驗(yàn)證過表達(dá)效率。1.qPCR檢測有過表達(dá)倍數(shù)，質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)效率高，基因本底豐度不太高的話一般都可以過表達(dá)50倍以上；2.使用Divergent引物檢測過表達(dá)的PCR產(chǎn)物是大小正確的單一條帶，PCR產(chǎn)物進(jìn)行sanger測序確定成環(huán)序列準(zhǔn)確。滿足這兩個(gè)條件才可以認(rèn)為載體實(shí)現(xiàn)了對circRNA的準(zhǔn)確高效率過表達(dá)。