TMT實(shí)驗(yàn)原理：

Tandem Mass Tag? (TMT?) 是由美國Thermo公司研發(fā)的體外同重同位素標(biāo)記的定量技術(shù)的專利產(chǎn)品，用于標(biāo)記不同的蛋白樣品并同時(shí)進(jìn)行高通量的 LC-MS/MS 的定量研究 。目前有 2-、6-、10- 等 3種通量類型，可分別平行處理 2個(gè)、6個(gè)和 10個(gè)樣品，顯著提高了蛋白樣品質(zhì)譜檢測(cè)的通量，減少所需質(zhì)譜機(jī)時(shí)；此外，由于采用了穩(wěn)定同位素標(biāo)記不同樣品，在標(biāo)記實(shí)驗(yàn)之后所有樣品混合成一個(gè)進(jìn)行后續(xù)處理，大大降低了實(shí)驗(yàn)誤差，使得定量準(zhǔn)確性顯著提高。

TMT同位素試劑標(biāo)記多肽氨基基團(tuán)后，等量混勻多肽并進(jìn)行LC-MS/MS分析。一級(jí)質(zhì)譜中，不同樣品來源的同一肽段表現(xiàn)出相同的m/Z；二級(jí)質(zhì)譜中，化學(xué)鍵斷裂釋放出報(bào)告離子，低質(zhì)量區(qū)的報(bào)告離子強(qiáng)度反映了該肽段在不同樣品中的相對(duì)表達(dá)量，高質(zhì)量區(qū)的肽段碎片離子m/Z反映了該肽段的序列信息。質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)經(jīng)過數(shù)據(jù)庫檢索，即可得到樣本中所含蛋白及其表達(dá)差異。

TMT標(biāo)記定量實(shí)驗(yàn)流程：

2-、6-、10-個(gè)樣品分別提取總蛋白，取等量蛋白進(jìn)行 Trypsin 酶切，得到相應(yīng)樣品的多肽；分別用不同的 TMT 標(biāo)簽對(duì) 2-、6-、10- 個(gè)樣品進(jìn)行標(biāo)記，隨后等量混合成一個(gè)樣品并進(jìn)行LC-MS/MS 分析和后續(xù)的數(shù)據(jù)庫比對(duì)，鑒定出樣品中含有哪些蛋白以及每個(gè)蛋白在樣品中相對(duì)含量。

圖1：輝駿生物TMT標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)流程圖

輝駿生物TMT技術(shù)服務(wù)優(yōu)勢(shì)

TMT應(yīng)用領(lǐng)域

基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)：疾病標(biāo)志物，發(fā)病機(jī)制，疾病分型等；

生物醫(yī)藥：藥物機(jī)理，藥效評(píng)價(jià)，藥物開發(fā)等；

農(nóng)林畜漁：抗逆脅迫，生長發(fā)育，耐藥，致病機(jī)理等。

TMT服務(wù)信息-輝駿生物

添加技術(shù)員微信溝通實(shí)驗(yàn)

18927549347

TMT標(biāo)記定量—輝駿生物客戶發(fā)表文獻(xiàn)

1. Li K. et al: Tyrosine kinase Fyn promotes osteoarthritis by activating the β-catenin pathway. Ann Rheum Dis, 0:1–9 (2018，IF=14.299).

2. Global iTRAQ-based proteomic profiling of Toxoplasma gondii oocysts during sporulation. J Proteomics.(2016 , IF=5.168).

4. Zeng L. et al: Asparagine Synthetase and Filamin A Have Different Roles in Ovarian Cancer. Front Oncol. (2019，IF=4.848).

輝駿實(shí)力