抗體蛋白質(zhì)測序只是簡單地定義未知抗體的氨基酸序列。 在抗體蛋白的從頭測序中使用質(zhì)譜法使得在沒有可用的細胞系或事先知道 DNA 序列的情況下執(zhí)行此操作成為可能。
蛋白質(zhì)分子的質(zhì)譜測量作為測序技術(shù)的基礎(chǔ),它只需要0.2毫克的蛋白質(zhì)。分析和報告之間的時間已縮短至數(shù)周。詳細報告包括重鏈和輕鏈序列、支持報告序列的相關(guān)數(shù)據(jù)以及對蛋白質(zhì)分子的其他評論。
對抗體使用從頭測序的好處包括:
如果產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤丟失或不可用,抗體本身仍然可以通過重組復(fù)制,只需使用 0.2 mg 單克隆抗體蛋白。如果連這么多都沒有,可能還有其他辦法。
使用具有優(yōu)化設(shè)置的高分辨率質(zhì)譜技術(shù) ,以及用于抗體從頭測序的專有軟件,意味著可以對整個蛋白質(zhì)從 n-term 到 c-term 進行測序,包括每個氨基酸。
由于在單獨肽的多個質(zhì)譜讀數(shù)中獲得了強信號峰特征,因此可以正確識別序列中的每個氨基酸。
基于質(zhì)譜的技術(shù)可用于測序所有類型的抗體,無論是 IgA、IgM、IgG、IgY、Fab、ScFv 等,來自所有類型的動物物種,包括小鼠、大鼠、兔子和倉鼠,除了來自人類。 它甚至已被用于對受污染或結(jié)合的抗體或成對具有不同輕鏈的抗體進行測序。
該技術(shù)的目標(biāo)是完美的質(zhì)譜蛋白質(zhì)測序。 這導(dǎo)致人們不斷努力生產(chǎn)優(yōu)化的工作流程和軟件,以便對每種蛋白質(zhì)進行測序,無論多么困難,并保持最高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
這種抗體從頭測序的使用通常會導(dǎo)致檢測到測序中的意外差異或蛋白質(zhì)分子上的新糖基化位點,而 DNA 測序無法檢測到這些差異。
用于從頭抗體測序的質(zhì)譜方法僅適用于等待測序的一個或數(shù)百個抗體分子。
在典型情況下,該技術(shù)需要 0.2 mg 或更多純度至少為 95% 的單克隆抗體。 分析后,可交付成果包括一份詳細的報告,其中給出了重鏈和輕鏈的完整序列,以及支持結(jié)果的相關(guān)數(shù)據(jù),以及任何其他有用的評論,例如觀察抗體的意外變化。 所需時間通常為收到樣品后 1-2 周。
輝駿生物是抗體蛋白質(zhì)測序技術(shù)的領(lǐng)導(dǎo)者,團隊專注于基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域,開發(fā)了無需訪問生產(chǎn)細胞系即可直接對抗體蛋白質(zhì)進行測序的技術(shù)。 輝駿生物抗體蛋白測序服務(wù)可在常規(guī)基礎(chǔ)上對任何給定的抗體蛋白進行準(zhǔn)確測序,保證100%測序準(zhǔn)確度,對輕鏈的測序誤差范圍在+/-1.2Da,對重鏈的誤差范圍在+/-1.8Da,保證交付抗體活性,不成功不收費。
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